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研究背景
原发性肝细胞癌占恶性肿瘤发病率的4﹪,在我国肝癌的死亡人数为各种肿瘤的第二位,每年约有11.2万人死于肝癌。而乙型肝炎病毒(HBV)的持续感染与肝癌的关系密切,是肝癌的主要病因之一。目前治疗HBV药物主要是重组干扰素及核苷类药物,但疗效仍不令人满意。RNAi是抑制基因表达的强大武器。siRNA作为一种新型强大的抑制基因表达武器,它具有高效性、特异性,副作用少的特点。
材料与方法
我们将siRNA转入含HBV病毒基因的肝癌细胞中(HepG2.2.15),测定上清中HBsAg表达及HBV DNA拷贝数;用MTT法评估其增殖能力,用悬浮培养法观察细胞自我更新能力。
实验结果
实验发现siRNA能有效减少HBsAg分泌和HBV DNA拷贝数,其中HBsAg抑制率最高至83.9﹪,HBV DNA拷贝数抑制率从最高至73.4﹪。MTT法发现抑制率最高的siRNA转染细胞后,第五天其增殖能力均空白组明显减弱,而其他组与空白组无明显区别。而转染了siRNA的HepG2.2.15细胞球囊形成率降低。
结论
siRNA能有效减少HBV复制及蛋白表达;抑制HBV表达后能抑制HepG2.2.15细胞的增殖及自我更新能力。