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过氧化物酶(peroxidase,POD,EC1.11.1.7)是广泛存在于各种动物、植物和微生物体内的、其结构和作用机理并不完全相同的一类含血红素的氧化酶,一般含有铁或铜等金属离子,具有多种生理功能。银杏(Ginkgo biloba)为银杏科植物,是现存裸子植物中与恐龙同时代的最古老的孑遗植物,被公认为“活化石”,是中国特有的珍贵树种。银杏的叶和果有重要药用价值,国内外学者对银杏的化学成分、药用作用等进行了大量研究,证实了银杏叶及其提取物(EGB)在治疗心脑血管疾病、高血脂症均有良好的作用,同时在呼吸系统、神经系统疾病等方面有很好的疗效。但对银杏叶POD的研究还不多见,本文对银杏叶中POD及其同功酶进行了分离、纯化及其性质研究,得到了以下主要结果:1.银杏叶POD表观酶活性质及海藻糖对其的影响对银杏叶过氧化物酶热稳定性、最适pH值及海藻糖对酶热稳定性的保护作用和pH值的影响进行了初步研究。结果表明,在40℃和50℃条件下分别处理30min,过氧化物酶活性分别剩余78%和39%,在60℃、70℃、80℃下活性可分别维持27、18和3min。银杏叶过氧化物酶最适pH值为6.4和9.2。加入海藻糖后酶活性略有降低(活性丧失约8%),但加热后海藻糖的保护优势得以显现,海藻糖浓度为0.14mol/L时保护效果最好,而且不同温度处理下酶活的下降趋势均较对照组缓慢,尤其在50℃、60℃、70℃条件下,相比对照组高出12%~27%的活性,加热时间长短对海藻糖的保护效果无太大影响。经0.14mol/L浓度的海藻糖处理后,酶活的最适pH值为6.6和9.4。2.银杏叶POD的分离纯化从新鲜银杏叶中分离纯化了一种过氧化物同工酶,纯化过程包括匀浆、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析和DEAE-A52纤维素柱层析,纯化倍数为14.71,回收率为15.3%,PAGE和SDS-PAGE电泳检测均为单一条带。3银杏POD的酶学性质的研究纯化后的银杏叶POD最适pH值为5.8,pH值为4.8和7.2时达到最适pH值时活性的一半;在25~60℃范围内分别测定纯化的银杏叶POD酶活性,银杏叶POD最适反应温度为37℃,随着温度升高,酶活力逐渐下降;热稳定实验结果表明纯化的银杏叶POD在40℃处理30min后活性变化不大,50℃、60℃处理30min分别剩余52%和11%的活性,70℃、80℃下活性可分别维持24和6min;纯化的银杏叶POD与相同浓度的商品辣根POD在60℃进行比较,结果表明银杏叶POD热稳定性较高,50℃下保温80min仍维持活性的20%;50℃条件下处理时间在50min以内时,银杏叶POD比辣根POD热稳定性略高,而超过50min后热稳定性较之略低;海藻糖对纯化后的银杏叶POD具有保护作用,与未加海藻糖的相比热失活减缓,同时海藻糖的加入使最适pH由5.8变为6.2;测定了其它几种化合物对POD酶活性的影响,二硫苏糖醇(DTT)和抗坏血酸POD活性有抑制作用;MnSO4、ZnSO4、NaCl、KNO3、FeCl3、CuSO4有激活作用。柠檬酸、FeSO4、SDS、ZnSO4对POD活性均有不同程度的抑制作用。