银杏叶过氧化物酶分离纯化及热稳定性研究

来源 :河北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nihaosww
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
过氧化物酶(peroxidase,POD,EC1.11.1.7)是广泛存在于各种动物、植物和微生物体内的、其结构和作用机理并不完全相同的一类含血红素的氧化酶,一般含有铁或铜等金属离子,具有多种生理功能。银杏(Ginkgo biloba)为银杏科植物,是现存裸子植物中与恐龙同时代的最古老的孑遗植物,被公认为“活化石”,是中国特有的珍贵树种。银杏的叶和果有重要药用价值,国内外学者对银杏的化学成分、药用作用等进行了大量研究,证实了银杏叶及其提取物(EGB)在治疗心脑血管疾病、高血脂症均有良好的作用,同时在呼吸系统、神经系统疾病等方面有很好的疗效。但对银杏叶POD的研究还不多见,本文对银杏叶中POD及其同功酶进行了分离、纯化及其性质研究,得到了以下主要结果:1.银杏叶POD表观酶活性质及海藻糖对其的影响对银杏叶过氧化物酶热稳定性、最适pH值及海藻糖对酶热稳定性的保护作用和pH值的影响进行了初步研究。结果表明,在40℃和50℃条件下分别处理30min,过氧化物酶活性分别剩余78%和39%,在60℃、70℃、80℃下活性可分别维持27、18和3min。银杏叶过氧化物酶最适pH值为6.4和9.2。加入海藻糖后酶活性略有降低(活性丧失约8%),但加热后海藻糖的保护优势得以显现,海藻糖浓度为0.14mol/L时保护效果最好,而且不同温度处理下酶活的下降趋势均较对照组缓慢,尤其在50℃、60℃、70℃条件下,相比对照组高出12%~27%的活性,加热时间长短对海藻糖的保护效果无太大影响。经0.14mol/L浓度的海藻糖处理后,酶活的最适pH值为6.6和9.4。2.银杏叶POD的分离纯化从新鲜银杏叶中分离纯化了一种过氧化物同工酶,纯化过程包括匀浆、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析和DEAE-A52纤维素柱层析,纯化倍数为14.71,回收率为15.3%,PAGE和SDS-PAGE电泳检测均为单一条带。3银杏POD的酶学性质的研究纯化后的银杏叶POD最适pH值为5.8,pH值为4.8和7.2时达到最适pH值时活性的一半;在25~60℃范围内分别测定纯化的银杏叶POD酶活性,银杏叶POD最适反应温度为37℃,随着温度升高,酶活力逐渐下降;热稳定实验结果表明纯化的银杏叶POD在40℃处理30min后活性变化不大,50℃、60℃处理30min分别剩余52%和11%的活性,70℃、80℃下活性可分别维持24和6min;纯化的银杏叶POD与相同浓度的商品辣根POD在60℃进行比较,结果表明银杏叶POD热稳定性较高,50℃下保温80min仍维持活性的20%;50℃条件下处理时间在50min以内时,银杏叶POD比辣根POD热稳定性略高,而超过50min后热稳定性较之略低;海藻糖对纯化后的银杏叶POD具有保护作用,与未加海藻糖的相比热失活减缓,同时海藻糖的加入使最适pH由5.8变为6.2;测定了其它几种化合物对POD酶活性的影响,二硫苏糖醇(DTT)和抗坏血酸POD活性有抑制作用;MnSO4、ZnSO4、NaCl、KNO3、FeCl3、CuSO4有激活作用。柠檬酸、FeSO4、SDS、ZnSO4对POD活性均有不同程度的抑制作用。
其他文献
分析了负离子纤维的性能,开发出了负离子丙纶纤维和棉纤维的混纺纱,并测试了负离子发射率,认为具有很好的保健性。
[目的]探讨不同膳食因素与血清总三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)的关系。[方法]采用
玉纯洁温润,以其特殊的质地和与众不同的美感,深受中国人的崇尚和喜爱。玉雕是玉文化的延伸和升华。玉雕是玉雕师选择天然玉材,经过精心设计、反复琢磨后,用玉雕工具由表及里
以苏教版高中化学2专题2"化学反应速率"两节同题异构课为研究对象,对比分析了两节课的课题导入、概念建构、实验设计和课堂小结四个教学环节,并就优化实验的开发与设计、难点
学生在学习数学中经常会遇到上课听得懂但不会做题,每个知识点都知道但不会归纳、总结,学习很用功,但成绩上不去等问题,其症结就在于学习不得法。文章从数学学法指导的意义、
铁艺作为一种建筑装饰艺术,在英国工艺美术运动之后成为建筑装饰组成部分,在欧洲得到广泛应用,并在新艺术运动中得到发展。文章简述了铁艺装饰艺术的历史渊源及其特点和风格,
[目的]探讨分析集中空调通风系统卫生管理的要素。[方法]收集国内外相关标准、规范,结合现场调查和检测数据,对集中空调通风系统卫生管理内容进行综合分析。[结果]综合分析得
内蒙古乌达煤田火区历史长、火势复杂、面积大,既吞噬煤炭资源,又造成严重的环境污染.针对本区地下煤火发生机理,选择适合地质特点的成孔工艺和具有多项优点的矿用固化泡沫注
<正>复旦大学公共卫生学院周志俊教授联合旅美学者顾新生、刘江红组织翻译的英文版图书《A Small Dose of Toxicology》,由上海世纪出版集团作为世纪人文系列丛书中的一部分
会议