人CD55抗原模拟表位的筛选及其对乳腺癌细胞的抑瘤作用研究

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目的:利用噬菌体肽库展示技术从Ph.D.12噬菌体肽库中筛选能够和人CD55单克隆抗体(CD55 Mc Ab)特异性结合的短肽,从中找到CD55的抗原模拟表位,设计出与人肿瘤免疫逃逸蛋白CD55同源的的短肽,为肿瘤治疗奠定理论基础。方法:以人CD55单克隆抗体为靶标,Ph.D.12肽库通过4轮噬菌体筛选淘选出与CD55单克隆抗体特异性结合的短肽,计算每轮回收率。4轮筛选后,随机挑选11个噬菌体单克隆和野生型噬菌体进行竞争结合,计算其结合力。利用ELISA、竞争结合实验鉴定筛选出结合力强的噬菌体单克隆,E.coli ER2378宿主菌表达和纯化噬菌体。将阳性噬菌体克隆交由公司测序,测序结果里找出出现频率高的短肽序列,设计与人CD55单克隆抗体具有高亲和性及特异性的短肽,并对其体外抗乳腺癌作用效果进行研究。CCK8实验检测CD55抗原模拟表位对乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7细胞)增殖的影响。荧光显微镜验证短肽在细胞中的摄入和分布。透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)和流式细胞术检测该短肽在乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞凋亡中的影响。结果:4轮筛选后,每轮噬菌体回收率都达到了较高数量级。竞争结合实验结果显示11个噬菌体单克隆和第3、4轮筛选后的噬菌体都与CD55单克隆抗体亲和力都非常显著。ELISA结果显示有8个噬菌体单克隆和CD55单克隆抗体亲和力显著。根据测序结果得到两条高表达短肽序列HAHTPTRGVMHA(简称H肽)和QVNGLGERSQQM(简称Q肽)。CCK8实验证明Q短肽序列对乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的毒性作用显著且具有剂量依赖性,而H短肽较Q肽药效较差,达到相同抑瘤率所需作用浓度较高。荧光显微镜观察到Q短肽分布在细胞膜表面。透射电镜和流式细胞术显示Q短肽具有诱导MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡的作用。结论:利用噬菌体随机12肽库成功得到两条CD55单克隆抗体特异性结合的CD55抗原模拟表位短肽序列HAHTPTRGVMHA和QVNGLGERSQQM,其中Q肽比H肽作用更显著,能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,为乳腺癌靶向治疗提供新思路和新靶标。
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