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第一部分:实验性蛛网膜下腔出血后兔脑血管痉挛模型的基底动脉病理改变目的建立兔颈动脉结扎后枕大池穿刺二次注血后的蛛网膜下腔出血模型,观察其神经行为学和基底动脉的病理学改变。方法采用右侧颈动脉结扎后枕大池二次注血的方法(两次注血时间间隔为48小时)制成兔蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)模型。实验30只兔随机分为5组,即结扎右侧颈动脉后枕大池二次注射生理盐水组作为对照组、结扎后枕大池二次注血组(SAH3d组、SAH 7d组、SAH 10d组、SAH 14d组),每组6只。观察并比较各组实验动物神经行为学改变、对各组脑组织大体标本的观察、利用光镜、电镜对基底动脉形态学观察以及TUNEL染色技术观察血管内皮细胞的凋亡、免疫组化法检测P-JNK及Caspase-3蛋白表达。结果神经行为学检测:对照组在注射生理盐水前后无明显变化,SAH组均出现了神经行为学的改变,且持续时间较长。通过光镜和透射电镜检查及横截面积测量显示出血后3d出现血管管腔狭窄、横截面积减小、管壁增厚、内皮细胞变性,并随时间推移加重,尤以7d为著,10d后缓解。基底动脉血管内皮细胞磷酸化JNK(P-JNK)在SAH后3d即呈阳性表达,7d最为明显,10d后逐渐下降。SAH组基底动脉壁出现胞浆浓缩、核染色质浓缩边集等凋亡样改变、较多血管内皮细胞TUNEL染色阳性,同时内皮细胞中Caspase-3蛋白表达上调,而对照组无明显上述表现,结果提示本实验建立的症状性脑血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)模型为较可靠的动物模型,与文献报道一致。结论1.本实验制作的症状性CVS模型,在二次注血后均出现神经行为学改变,大多于2d后缓解,渐恢复正常。血管痉挛在注血后3d开始,7d到达高峰,10d后逐渐缓解。实验结果提示此模型较为满意地模拟了临床上SAH后症状性CVS的病理生理变化。2.SAH后血管内皮细胞P-JNK表达上调,胞浆Caspase-3呈阳性表达,基底动脉的血管内皮TUNEL染色阳性细胞明显增多,并且其活化水平在时程上的改变与基底动脉病理生理变化密切相关,提示JNK介导的细胞凋亡可能在CVS的形成和发展中起到一定的作用。第二部分JSK抑制剂对蛛网膜下腔出血后症状性脑血管痉挛的影响目的研究JNK特异性抑制剂—SP600125对SAH后症状性CVS的影响,以探讨蛛网膜下腔出血后CVS细胞信号转导通路机制。方法24只兔随机分为对照组(枕大池注入生理盐水)、SAH(7d)组、DMSO组(SAH+载体dimethyl sulfoxide DMSO)和SP600125组(SAH+SP600125),每组6只,右侧颈动脉结扎后枕大池二次注血的方法建立兔症状性CVS模型。应用光镜、透射电镜、免疫组化等方法检测各组动物基底动脉形态的变化,及使用SP600125干预后对上述表达的影响。结果和对照组比较SAH组及DMSO组基底动脉管腔明显狭窄;P-JNK检测见大量棕黄色的阳性细胞;血管内皮细胞中Caspase-3蛋白表达上调;TUNEL染色阳性内皮细胞较多;SAH组和DMSO组之间无明显差异。应用JNK特异性抑制剂的SP600125组动物脑基底动脉狭窄改善,Caspase-3以及TUNEL染色阳性内皮细胞与SAH组或DMSO组相比下降,有显著差异(P＜0.05),同时病理检查显示基底动脉管壁增厚、内皮细胞凋亡样改变减轻,对照组与SP600125组比较差异不明显。结论1.JNK特异性抑制剂—SP600125能减轻实验动物的神经行为学症状,明显缓解SAH后脑血管痉挛,使Caspase-3以及内皮细胞TUNEL染色阳性细胞减少,凋亡样改变减轻。2.进一步证实JNK介导的细胞凋亡可能在症状性CVS的形成和发展中起到了重要作用,抑制JNK信号转导后上述痉挛及凋亡样改变等减轻,因此本实验可能为症状性CVS治疗提供了一条新的途径。