中药配方颗粒是以符合炮制规范的优质中药饮片为原料,采用现代制药技术经过提取、浓缩、制粒而成的系列产品。其性味、功效与原中药饮片一致,供中医临床配方使用,具有不需煎煮、直接冲服、服用量少、疗效确切、卫生安全、携带保存方便等优点,符合现代消费与生活需求,是一种安全、可控、高效、方便的现代中药汤剂,是传统中医药“辨证论治、随证加减”核心思想的最好体现。目前,中药配方颗粒年产值达数十亿人民币,产品已在全国2000多家医院广泛使用,并远销国外,创造了良好的社会和经济效益。随着种植环境的变化,以及中药饮片质量控制标准的不完善,中药饮片的质量在不断下滑；加之2010年版《中国药典》(以下简称为药典)中对制川乌仍然沿用经验法来判断炮制终点的标准主观性较强；中药配方颗粒生产采用离线质量检测,不便于进行实时监控；中药配方颗粒不具原有性状特征,常规检测方法繁琐,难以达到现代工业化生产的快速、便捷、及时的要求。本课题以制川乌规范化炮制工艺研究为起点,结合高效液相色谱法(HPLC)及近红外光谱法(NIR)考察了各工序下制川乌相关成分的变化规律,建立了制川乌相关成分含量的NIR预测模型,进而对制川乌配方颗粒生产工艺的各个环节进行了监控并制定了相关的终点判断标准,优化了制川乌配方颗粒生产的各个工艺参数,结合药理、毒理研究,为标准化生产提供了有力的实验依据。主要研究结果如下：1.应用近红外漫反射光谱法采集119个制川乌样品的NIR数据,采用PLS法分别建立近红外光谱信息与单酯型生物碱、双酯型生物碱、水分之间的定量分析模型。制川乌中单酯型生物碱、双酯型生物碱、水分的校正模型的建模光谱范围为8431.26-4075.93,5086.76～4088.64、7725.44-5924.25,7934.87～4088.64cm-1,校正模型的RMSEC单酯型生物碱=0.098,r单酯型生物碱=0.9559；RMSEC双酯型生物碱=0.034,r双酯型生物碱=0.9694;RMSEC水分=0.002,r水分=0.9767,验证模型的RMSEP单酯型生物碱=0.168,r单酯型生物碱=0.9266；RMSEP双酯型生物碱=0.039,r双酯型牛物碱=0.9826；RMSEP水分=0.004,r水分=0.8363。经统计学检验,三类成分的预测值与参考值的r分别为0.970、0.993、0.918,P<0.001,说明NIR与HPLC测定单酯型生物碱及双酯型生物碱的相关性较好,NIR与烘干法测定水分的相关性较好,可以较准确地预测其覆盖范围的相应物质含量。2.应用近红外透射光谱法搜集103个制川乌样品的NIR数据,采用PLS法建立NIR与单酯型生物碱之间的定量分析模型。制川乌提取、浓缩液中单酯型生物碱的NIR模型建模的光谱范围为9264.35～7274.11cm-1,校正模型的RMSECV=1.171,r=0.9994；经外部验证,RMSEP:1.321,r=0.9921;经SPSS15.0的相关性统计学分析,单酯型生物碱的NIR预测值与HPLC参考值的r=0.999,P<0.001,说明NIR与HPLC测定单酯型生物碱的相关性较好,可以比较准确地预测出其覆盖范围的单酯型生物碱的含量。3.以川乌中6种生物碱成分的含量为评价指标,以浸泡条件、蒸制条件及干燥条件为考察因素,采用单因素实验法,对炮制工艺参数进行了优选,其工艺参数为：40℃水浸泡25±1h,111℃(0.05MPa)加压蒸制1h,取出,晾至六成干,切片,60℃烘干,所得样品中的双酯型生物碱及单酯型生物碱含量均达到药典要求。川乌在111℃(0.05MPa)下炮制15-150min内,制川乌中单酯型生物碱时量变化关系曲线拟合回归方程为C(mg/g)=0.273+0.236×1nt(min)(R2=0.753,F=48.818,必0.01),双酯型生物碱为C(mg/g)=0.115×t-0.005(min)(R2=0.850,F=90.660,P<0.01)。4.根据单因素试验及正交试验设计得到的优选的制川乌配方颗粒提取工艺为加10倍量水,提取3次,每次2h；浓缩工艺为75℃进行减压浓缩；干燥工艺为料液相对密度1.10(60℃)、进风温度165℃、出风温度70℃进行喷雾干燥；成型工艺为取干浸膏粉(物料水分控制在3-4%,制粒过程中适量喷洒95%药用乙醇),置干法制粒机制粒,控制压轮压力0.3-0.35Mpa,,侧封压力0.05-0.06Mpa,装12目筛整粒,取1～4号筛之间的颗粒为合格颗粒。5.对制川乌炮制终点的研究表明,单酯型生物碱的含量为1.400mg/g左右,且双酯型生物碱的含量为0.100mg/g左右时即可终止炮制,经SPSS15.0的相关性统计学分析,NIR预测值与HPLC参考值的相关系数r单酯型生物碱=0.991,r双酯型生物碱=0.998,NIR预测值与烘干法参考值的相关系数r水分=0.958,P<0.001,说明NIR预测值与HPLC参考值、烘干法参考值的相关性较好,可用于制川乌配方颗粒炮制过程中相关成分的含量预测；对制川乌配方颗粒提取终点的研究表明,第一次提取的提取终点为102～105μg/L,第二次提取的提取终点为37μg/L,第三次提取的提取终点为16μg/L,单酯型生物碱的NIR预测值与HPLC参考值的相关系数r=0.999,P<0.001,说明NIR预测值与HPLC参考值的相关性较好,可用于制川乌配方颗粒提取过程中相关成分的含量预测；对制川乌配方颗粒浓缩终点的研究表明,浓缩的终点为156-159μg/L,单酯型生物碱的NIR预测值与HPLC参考值的相关系数r=0.999,P<0.001,说明NIR预测值与HPLC参考值的相关性较好,可用于制川乌配方颗粒浓缩过程中相关成分的快速检测；在制川乌喷干粉的含量预测中,单酯型生物碱的预测值与参考值的r=0.901,P<0.001,水分的预测值与参考值的r=0.880,P<0.001,说明NIR与药典中的方法测定出来的数据相关性较好,可用于制川乌喷干粉的相关成分快速检测;在制川乌配方颗粒成品的含量预测中,配方颗粒样品中单酯型生物碱的NIR预测值与HPLC参考值的相关系数r=0.957,P<0.001,水分的NIR预测值与烘干法参考值的相关系数r=0.961,P<0.001,说明NIR预测值与HPLC参考值、烘干法参考值的相关性较好,可用于制川乌配方颗粒的相关成分快速检测。6.在急性毒性试验中,制川乌配方颗粒组及标准煎剂组在小鼠最大给药量为150.00g生药/kg时对小鼠未产生毒性反应,表明制川乌标准煎剂及配方颗粒具有较高安全性,通过科学的炮制方法可确保制川乌用药安全性。在小鼠扭体试验中,制川乌配方颗粒组与制川乌标准煎剂组比较,小鼠潜伏时间延长、扭体次数显著性减少,说明在镇痛效应方面制川乌配方颗粒的作用好于制川乌标准煎剂组。在抗炎药效等效性研究中,在小鼠耳廓肿胀抑制率22.51%-38.65%共同效应范围内,1/2、1、2倍临床等效剂量(195.00、390.00、780.00mg/kg)制川乌标准煎剂等效于0.07、0.20、0.46倍临床等效剂量(27.36、77.67、178.29mg/kg)制川乌配方颗粒所能产生的抗炎效应,制川乌配方颗粒等效剂量DEE制川乌配方颗粒(mg/kg)=-22.950+0.258×DEE制川乌标准煎剂(mg/kg)(R2=0.958,r=0.979,P<0.01),回归系数b0=-22.950,95%可信区间(95%CI)为(4.549,41.351),与总体均值0相比,有显著性差异(P<0.05),常数项b1=0.258,95%CI为(-0.218,0.299),与总体均值1相比,有显著性差异(P<0.05)。可知,制川乌配方颗粒和制川乌标准煎剂的等效应剂量不具有等效性,制川乌配方颗粒等效应剂量较制川乌标准煎剂小。制川乌配方颗粒与制川乌标准煎剂药剂量在1/8-1倍临床等效应剂量范围内(48.75-390.00mg/kg)具有可比性,制川乌配方颗粒的等剂量效应EED制川乌配方颗粒(%)=2.963+1.573×EED制川乌标准煎剂(%)(R2=0.923,r=0.961,P<0.01),回归系数b0=2.963,95%CI为(-5.373,11.300),与总体0比较有显著性差异(P<0.05),常数项b1=1.573,95%CI为(1.230,1.915),与总体均值1相比有显著性差异(P＜0.05)。可知,制川乌配方颗粒和制川乌标准煎剂的等剂量效应不具有等效性,制川乌配方颗粒等剂量效应较制川乌标准煎剂大。