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目的:研究苦参碱诱导人乳腺癌 Bcap-37细胞自噬及凋亡的作用,为苦参碱用于乳腺癌治疗提供理论依据。 方法:苦参碱(终浓度为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 mg/ml)分别作用于乳腺癌Bcap-37细胞24、48、72小时,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态变化;Annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡率;运用Western-blotting方法检测Cleaved PARP和Lc3b-I/Lc3b-II蛋白表达水平。苦参碱联合氯喹(chloroquine)(自噬抑制剂)处理Bcap-37细胞后,运用MTT法检测细胞增殖抑制率的变化。实验数据采用Spss17.0软件进行统计,计量资料用均数±标准差(x±S)表示,多组均数间比较用方差分析,两组均数比较用T检验,均以P<0.05为差异显著的检验标准。 结果:⑴苦参碱对乳腺癌Bcap-37细胞的增殖有显著的抑制作用,并发现其生长抑制作用强度呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。 ⑵苦参碱作用于乳腺癌Bcap-37细胞24小时后,经流式细胞技术检测证实能明显诱导细胞凋亡,早期凋亡率为:空白组5.18%±0.56,1mg/ml组10.35%±1.04,2mg/ml组32.06%±2.88,总凋亡率为:空白组7.69%±0.73,1mg/ml组为14.30%±1.61,2mg/ml组为52.00%±3.65,凋亡率与苦参碱浓度成正相关(P<0.05);经Western-blot测定显示,苦参碱浓度在2mg/ml时Cleaved PARP蛋白印迹条带灰度明显加深。此外,在光镜下还发现胞浆出现大量囊性小泡,经透射电镜扫描证实细胞发生自噬现象;Western-blot检测发现伴随Lc3b-II蛋白表达上调。表明在苦参碱作用下肿瘤细胞存在凋亡与自噬共存现象。 ⑶但是,在苦参碱基础上联合自噬抑制剂氯喹,Bcap-37细胞的增殖抑制作用反而更强,联合组较苦参碱组和苦参碱组较对照组或氯喹组均表现为明显的生长抑制作用(P<0.01),而自噬抑制剂氯喹确有刺激肿瘤生长的趋势(P=0.53)。 结论:⑴苦参碱可显著抑制人乳腺癌Bcap-37细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,作用机制为促进肿瘤细胞凋亡,并伴随细胞自噬现象; ⑵苦参碱诱导的人乳腺癌Bcap-37细胞自噬现象可能是细胞的一种保护性反应,部分限制了苦参碱对肿瘤细胞的促凋亡作用,而自噬抑制剂氯喹则可增强苦参碱抑制细胞增殖的作用。