端粒酶逆转录酶基因在心肌中的表达及骨髓基质细胞培养液对心肌的保护机制研究

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第一部分 低氧心肌细胞周期变化与TERT表达调控 目的 研究大鼠心肌细胞低氧状态下细胞周期变化、缺氧过程中端粒酶逆转录酶(TERT)基因表达的变化以及TERT启动子活力的影响因素,初步了解缺氧是否影响心肌细胞TERT启动子活力。 方法 采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,置于5%CO2+95%N2孵箱中培养,建立心肌缺血模型。实验分三组:1.正常对照组;2.缺血6小时模型组;3.缺血12小时模型组。以流式细胞仪测定心肌细胞周期,RT-PCR检测心肌细胞TERT表达。构建含TERT启动子的pEGFP质粒转染心肌细胞,缺氧处理后,通过激光共聚焦显微镜观察搏动心肌细胞绿色荧光蛋白表达。分析缺氧对TERT启动子表达的影响。 结果 心肌细胞经过缺氧6h处理后,其细胞周期中S期比例增高,与对照组相比差异显著(P<0.01)。TERT在胎鼠心肌细胞中有明显表达,在培养5天后表达明显减弱,培养5天的心肌细胞经过缺氧处理6小时,TERT表达增强。含有TERT启动子PEGFP质粒转染心肌细胞后,初步观察到缺氧可以激活启动子而使绿色荧光蛋白表达。 结论 本研究缺氧6小时与正常组和12小时缺氧相比S期百分比明显增高,观测到TERT表达,可能缺氧激活了TERT启动子,促进了TERT的表达而增加端粒酶活性。反映在缺氧所致死亡、凋亡过程中心肌细胞经历了一定程度的增殖过程,表明在心肌细胞一定程度上具有增殖能力。
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