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研究背景:角膜深低温保存技术是Capella等于1965年创立的单纯角膜组织保存方法。该方法可使角膜内皮细胞长期处于“休眠状态”,保存期间内皮细胞活性不随时间延长而减弱。4℃湿房保存是一种简便的全眼球保存方法,它不易污染,便于运送和取材,但角膜内皮细胞活性保存时间短。将两者优点结合起来,探索一种既简便经济,又确实有效的长期深低温全眼球活性保存角膜方法,以促进眼库保存技术的发展。目的:探索全眼球深低温活性保存角膜的最佳模式,研究影响深低温全眼球保存法的角膜内皮细胞活性的因素。方法:根据深低温冷冻保存过程中前房内注入二甲基亚砜(DMSO)的方式,降温速率及复温条件的不同,将80只成年纯种新西兰兔眼球随机分为8组,冷冻保存时间30天。另取10只新鲜兔眼做对照。通过角膜内皮细胞活性染色方法评定各组角膜内皮细胞存活率(ESR)及光镜下内皮细胞形态,优选出最佳保存方法。将优选组角膜与对照组同时进行电镜检查及琥珀酸脱氢酶(SDH)组织细胞化学染色,对比观察两组细胞的超微结构及酶活性。结果:评定出角膜内皮细胞存活率最高组,为最佳冻存组,其方法如下:抽空房水,注入7.5% (V/ V) DMSO , 4℃冰箱内冷平衡30min,其间每隔15 min抽出前房内保护液后再次注入7.5%DMSO,共反复2次。再分段降温,-30℃30min,-80℃30min,最后将全眼球移入-196℃液氮中保存;40℃水浴中快速复温。该组角膜内皮细胞存活率平均为87.53%,与对照组(98.20%)比较,结果相近,符合临床穿透性角膜移植标准。最佳冻存组、对照组的SDH酶组织化学检测均呈阳性反应,最佳冻存组与对照组相比,颜色略浅,平均积分光密度值(IOD)分别为133.0±19.2和134.1±24.0,t=0.1,差异无统计学意义(P > 0.05)。结论:深低温全眼球活性保存角膜方法简便,保存的角膜内皮细胞活性较高,符合临床上穿透性角膜移植的标准。