微囊藻产毒株与无毒株对浮游动物繁殖干扰的比较研究——以大型溞为例

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水华蓝藻可以通过释放有害物质干扰水体其他生物的生长、发育和繁殖、影响水生生态系统。微囊藻是蓝藻水华的常见优势属,该属一些物种的无毒株与产毒株时常共存于富营养化水体。但目前绝大多数研究往往仅关注产毒株,且无毒株与产毒株的差异是否只限于有无藻毒素合成,目前尚不清楚。浮游动物在水生生态系统的物质转化和能量传递中占据重要地位,其对环境变化的响应会进一步影响水体食物链的稳定性。为了比较微囊藻产毒株和无毒株对浮游动物繁殖的影响,本研究采用初始添加法探究了蓝藻水华两个优势种铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)与惠氏微囊藻(Microcystis wesenbergii)产毒株和无毒株的胞外分泌物(exudates)的慢性、急性暴露对浮游动物的模式物种大型溞(Daphnia magna)繁殖的影响。研究结果如下:(1)分别以四组微囊藻胞外分泌物(藻密度均为4×10~5cells/ml,简称为产毒MaE、无毒MaE、产毒Mw E、无毒Mw E)对大型溞进行21天慢性暴露,以空白处理为阴性对照组,添加藻毒素(MC)作为毒性对照组,结果发现各组微囊藻胞外分泌物不仅使大型溞体长显著增加,还使其怀卵提前,产幼溞数增加,其中无毒MaE组产幼溞数最多。(2)微囊藻胞外分泌物96h暴露的大型溞生理实验结果发现:四组微囊藻胞外分泌物以及MC的96h急性暴露均使得大型溞三酰基甘油(TAG)、卵黄蛋白原(VTG)、蜕皮激素、保幼激素含量增加;产毒MaE组的TAG、蜕皮激素和保幼激素均高于无毒MaE组;而产毒Mw E组的TAG、VTG和蜕皮激素均高于无毒Mw E组。(3)微囊藻胞外分泌物96h暴露的大型溞基因表达结果显示:产毒MaE组诱导的差异表达基因数最多,KEGG富集通路上以自噬的上调表达与核糖体、内质网蛋白合成、RNA转运、剪接体、氧化磷酸化、碳代谢、糖酵解等代谢途径的下调表达为主;无毒MaE组诱导的差异基因最少,诱导了大型溞酪氨酸代谢、氧化磷酸化等代谢途径的上调表达;产毒Mw E组诱导了大型溞氧化磷酸化途径的上调表达,剪接体、鞘糖脂生物合成-乳糖和新乳糖系列途径的下调表达;无毒惠氏微囊藻诱导了大型溞氧化磷酸化途径的上调表达。转录组中并未体现出无毒MaE对大型溞繁殖内分泌激素合成基因的贡献。通过荧光定量PCR实验验证了产毒MaE组大型溞17β-HSD酶基因的上调表达;也验证了与产毒MaE组相比无毒MaE组TAG、Glycerate-2P、十六酰辅酶A合成酶的基因以及丙酮酸羧化酶、NADH脱氢酶基因的上调表达。(4)产毒MaE组可能通过增强大型溞17β-HSD酶基因表达、促进下游从蜕皮激素、保幼激素合成到卵黄蛋白原合成,最终增强其怀卵、产幼;无毒MaE组可能是通过对大型溞TAG生成上游的能量和物质转化过程进行正向诱导而增强其TAG储存以供大量怀卵;产毒Mw E组与产毒MaE组的作用途径类似;无毒Mw E组对大型溞繁殖的干扰机制主要途径可能是依赖于其繁殖激素水平的提高以及卵黄蛋白原合成的增加。综上所述,微囊藻产毒株与无毒株均可能影响浮游动物的怀卵和产幼数量,且无毒株可能具有更强的生殖干扰效应,其潜在危害不容忽视。本研究指出了将无毒株纳入蓝藻水华生态危害评估的必要性,也提示了关注惠氏微囊藻的重要意义。
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