目的:制备壳聚糖-胶原-激光微孔猪脱细胞复合真皮基质（Chitosan-Chollagen Laser Micropore Porcine acellular composite dermalmatrix,CCLMPADM）,并将成纤维细胞（Fibroblast,Fb）引入其中,构建含活性细胞成分的新型真皮替代物,用于全层皮肤缺损的修复研究,为进一步提高移植物性能打下基础。方法:1.按不同比例将壳聚糖（1mg/ml）、鼠尾胶原（3g/L）进行混合,并通过冷冻与干热两种方法制备壳聚糖-胶原膜（Chitosan-Collagenmembrane,CCM）,对CCM的物理性能以及生物相容性进行研究,来确定合适的CCM制备方法。2.体外进一步完善皮肤种子细胞库,对Fb培养方法与Ca²⁺对角质形成细胞（HKC）的调控作用进行研究,并应用鼠尾胶原构建全层组织工程皮肤,为进一步的研究工作打下基础。3.体外构建CCLMPADM,并将Fb引入其中,构建活性CCLMPADM。36只SD大鼠作全层皮肤缺损模型,随机分为3组,每组12只:①微孔猪脱细胞真皮基质（Porcine acellular dermal matrix,PADM）组（对照Ⅰ组）:自体刃厚皮+微孔PADM;②CCLMPADM组（对照Ⅱ组）:自体刃厚皮+CCLMPADM;③活性CCLMPADM组（实验组）:自体刃厚皮+活性CCLMPADM。进行全层皮肤缺损的修复,并对移植物成活情况、组织学进行观察。结果:1.干热法制备支架为透明光滑膜片,机械强度较高。冻干法制得支架为乳白色半透明膜片,吸水率、保水率较高。相同干燥方法时,当壳聚糖与胶原比例为8/2时,形成膜片机械强度达最大值。随胶原含量的增加,保水率与吸水率逐渐增大。CCM相容性显示,冻干法与干热法成膜,人角质形成细胞（Human Keratinocyte,HKC）的增殖率无显著性差异;但冻干法成膜的Fb增殖率高于干热法。相同制备方法,随胶原含量的增加,Fb与HKC的增殖率显著增高。包埋实验显示CCM组织相容性良好,随胶原含量增加,材料降解速度加快。2.成功建立胎儿HKC库与胎儿Fb库;改进的Fb培养方法具有培养周期短,细胞损伤小等特点;不同浓度的Ca²⁺对HKC的增殖与分化有不同作用;以鼠尾胶原作为载体,采用液气平面培养,可成功构建全层组织工程皮肤替代物。3.成功构建活性CCLMPADM,用于全层皮肤缺损修复,显示愈合情况明显优于PADM组与CCLMPADM组。结论:1.壳聚糖胶原比例为5/5或3/7时,是较理想的构建组织工程材料的构成比;冷冻干燥法更适于制作真皮替代材料。2.改进组织块法是较理想的Fb培养方法;Ca²⁺对HKC增殖与分化具有重要作用;采用鼠尾胶原、三维培养及液气面培养技术,可以构建全层皮肤模型。3.壳聚糖、胶原的引入,使Fb更容易的引入激光微孔PADM。活性CCLMPADM是较理想的真皮修复材料。