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结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）是最常见肿瘤。基因异常是结直肠癌的重要致病原因。近年来发现长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）在肿瘤病理过程中的具有重要意义。我们比较了结肠癌组织和正常组织中lncRNA表达谱芯片数据,发现了一个新的lncRNALNRRIL6（ak024522）在CRC肿瘤组织中异常升高。第一部分目的:检测CRC中LNRRIL6的表达量,探讨LNRRIL6表达与CRC临床表型、诊断、疾病分期和预后之间的关系。方法:收集了 66例结直肠癌患者术中的癌组织和相应癌旁组织,qRT-PCR法检测各标本中LNRRIL6的表达量。比较LNRRIL6高表达组和低表达组肿瘤临床指标之间的差异。分析2组间5年生存期的差异。qRT-PCR检测正常结肠上皮细胞NCM460和结肠癌细胞株HCT-116、LoVo、SW480、SW620和HT-29的LNRRIL6表达。结果:66例患者结直肠癌肿瘤组织中LNRRIL6的表达明显高于癌旁粘膜组织（p<0.01）。与低表达组相比,LNRRIL6高表达组肿瘤体积更大（p=0.049）、分化差（p=0.026）、有淋巴结转移（p=0.037）。高表达LNRRIL6组的5年总生存率（OS）明显差于LNRRIL6低表达组（p=0.0343）。qRT-PCR结果揭示LNRRIL6在多种结肠癌肿瘤细胞系中表达明显高于正常结肠上皮细胞。第二部分目的:检测LNRRIL6对肿瘤的大小、增殖和凋亡的影响,明确LNRRIL6对结肠癌肿瘤细胞的生物学作用。方法:构建LNRRIL6全长序列慢病毒载体和特异性针对LNRRIL6 cDNA的寡核苷酸沉默shRNA表达载体;转染LoVo和HCT-116细胞。检测细胞增殖及凋亡。建立皮下移植瘤模型,测量移植瘤体积,免疫组化染色检测瘤块Ki67和caspase-3阳性表达。结果:LNRRIL6全长序列有2017个核苷酸组成。构建了稳定过表达LNRRIL6的细胞系及两种靶序列不同的慢病毒LNRRIL6沉默的结肠癌细胞株。增殖凋亡检测表明,过表达LNRRIL6显著增加HCT-116和LoVo细胞活力（p<0.01）,并使EdU阳性率上升,凋亡细胞减少（p<0.01）;沉默LNRRIL6组细胞株细胞数量减少（p<0.01）,且EdU阳性的细胞明显减少,凋亡细胞明显增加（p<0.01）。体内移植瘤模型发现与对照组比较,过表达组在第21天以后肿瘤增殖速度加快（p<0.01）。沉默组瘤体积明显小于对照组（p<0.01）。第28天对照组（LV-NC）肿瘤重量小于过表达组（LV-LNRRIL6）（p<0.01）;对照组（LV-shNC）肿瘤重量大于沉默组（p<0.01）;Ki67阳性细胞数在过表达组明显多于对照组（p<0.01）,而对照组明显多于沉默组（p<0.01）;过表达组caspase-3阳性细胞的数量少于对照组（p<0.01）;而对照组该种细胞的数量少于沉默组,差别均有显著性（p<0.01）。第三部分目的:根据LncRNA-LNRRIL6细胞内定位情况,生物信息学预测LNRRIL6的靶向,验证LNRRIL6对IL-6的影响。方法:分离细胞质和核,qRT-PCR检测细胞核以及细胞浆中LNRRIL6的亚细胞定位。染色质RNA分离纯化实验（ChIRP）。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清中的IL-6含量,Western blot检测细胞内STAT3的活化。结果:LNRRIL6结合IL-6启动子区,超过80%的LNRRIL6在细胞核内。生物信息学分析的结果显示LNRRIL6的870bp-1180bp与IL-6启动子区具有较高同源性,有83%的序列相互匹配。CHIRP检测LNRRIL6反义探针相互结合与IL-6启动子区。LNRRIL6能激活IL-6/STAT3通路,ELISA和qRT-PCR检测显示LNRRIL6过表达的HCT116细胞内IL-6 mRNA表达水平和细胞培养上清液中IL-6蛋白水平明显增加;相反LNRRIL6沉默HCT116细胞系内显著减少。过表达组细胞中p-STAT3磷酸化活化增加。而沉默组细胞中p-STAT3蛋白含量降低。肿瘤组织中IL-6表达水平与LNRRIL6RNA水平具有良好的正相关关系（r=0.6917,p<0.0001）。使用IL-6信号通路抑制剂后发现,LNRRIL6促进肿瘤活力的效应消失（p<0.01）。第四部分目的:探讨抑制IL-6/STAT3并联合PDL1抑制结肠癌细胞生长的机制。方法:检测CT26.WT细胞及小鼠肠粘膜细胞的STAT3 mRNA的表达及PD-L1表达,构建STAT3沉默慢病毒,并转染CT26.WT细胞。构建老鼠移植瘤模型并按转染的载体分组,定期测量皮下肿瘤体积,第28天切除的肿瘤组织HE染色、Tunel检测细胞凋亡、检测C-met、PD-L1、STAT3蛋白免疫组化染色、基因表达、蛋白表达。结果:CT26.WT细胞高表达STAT3 mRNA及PD-L1,转染了 STAT3沉默慢病毒的小鼠体内肿瘤相对较小,联合沉默组的小鼠肿瘤体积最小。HE染色发现,与对照组相比,沉默STAT3单独作用组炎症轻,而联合沉默组炎症重。单独沉默作用组细胞凋亡有所增加,联合沉默组凋亡率明显升高。免疫组化、荧光定量PCR及Western blot检测提示联合沉默组中C-met、STAT3、PD-L1三个指标表达明显下降。结果差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1、长链非编码RNA-LNRRIL6在结直肠癌组织和结直肠肿瘤上皮细胞中高表达;促进结直肠癌细胞的增殖、抑制凋亡;与肿瘤体积、分化、肿瘤转移正相关,与生存期负相关;2、LNRRIL6表达在细胞核内,结合IL-6启动子,促进IL-6/STAT3信号通路活化;通过IL-6信号通路促进了肿瘤的增殖。3、联合应用PDL1及抑制IL-6/STAT3信号通路能更大程度抑制肿瘤的增殖。