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家蚕饲养在中国已经有5000多年的历史了,在蚕丝业有着极其重要的地位。随着科学技术的不断发展,家蚕也成为了鳞翅目昆虫中研究最为广泛的模式动物。由于家蚕开放式的循环系统,血液在其生命活动中承担着非常重要的生理功能。血液蛋白质组学研究有利于从分子水平深入地揭示血液在家蚕生命活动中的重要作用。而对血液的蛋白质进行糖基化研究将进一步完善蛋白质组学研究成果。家蚕的品种选育也是蚕丝生物学中的一个重大课题。深入了解家蚕对温度的应激反应机理,将有利于通过基因工程手段培育出产量高抗性强的优良品种。 本论文采用一种基于荧光染料Pro-Q Emerald300快速检测蛋白糖基化的方法,对p50(大造)品种的血液蛋白糖基化情况进行了分析,成功鉴定了其中12个糖蛋白。通过软件预测,其中11个糖蛋白都存在N位糖基化位点。在这些糖蛋白中,有些与免疫系统有关,如胰凝乳蛋白酶抑制剂、30K蛋白、转铁蛋白等。而有些则与程序性细胞凋亡有关,如IDGF蛋白和30K蛋白。这些具有重要生物功能的蛋白质都存在着或多或少的糖基化修饰,预示着蛋白糖基化的潜在功能。 昆虫对环境有一定的适应能力,对温度变化也是如此。昆虫对冷刺激会有不同程度的应答反应,不同昆虫之间可能存在着不同的应答机制。而且同一昆虫,在不同发育时期也可能有着不同的应答反应。通过对菁松品种不同发育时期的冷应激处理,我们发现了一个有意思的现象。五龄第三天经过8h冷应激后,在1h的恢复时间内基本上没有特异蛋白产生,而且一些蛋白表达量出现了下调趋势。而在五龄第四天中,我们却找到了19个新的特异表达蛋白,而且另外有9个蛋白表达量上调。这可能预示着五龄第四天有着比五龄第三天更强的适应性或者抗性。而那些特异蛋白可能跟家蚕的温度适应性和耐温性有关。 通过qRT-PCR方法,本论文还对一个耐热性品种和一个热敏感性品种进行了热应激研究。分析比较了这两个家蚕品种对热应激的反应差异,以及热激蛋白HSPs(包括HSP70和sHSPs)在不同品种、不同性别、不同热激处理之间的表达差异。结果表明,在热激处理后,家蚕脂肪体和生殖器官中,两种小分子量热激蛋白,HSP19.9和HSP20.4的表达量上调,而HSP70的表达量呈下降趋势。在不同的热应激环境和遗传背景下,小分子量热激蛋白的变化波动要比HSP70的变化波动要大。另外,热激蛋白在雌性家蚕中的表达量要明显比雄性家蚕低,耐热性品种的热激蛋白表达量也要比热敏感性品种低。这些实验结果暗示着热激蛋白在家蚕品种耐热性差异中起着重要的作用,而小分子量热激蛋白和HSP70可能在热应激环境中扮演着不同的角色。这将有助于进一步帮助理解昆虫耐热性与HSPs表达之间的复杂联系。