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背景和目的:出血后慢性脑积水(PHCH)是脑出血后常见的并发症,发生率较高。临床上,出血后脑积水以及继发的一系列脑实质损害极易引起患者病情迁延和加重,而导致预后不良。时至今日,脑出血后慢性脑积水的发生原因及机制仍然不明确。研究表明,脑出血后脑实质内和蛛网膜下腔中存留的血液分解代谢后会产生过量的铁离子蓄积,其可能在继发性脑损害中起重要作用。而最近的多份研究显示蛛网膜纤维化可能参与了PHCH的发生,但机制同样缺乏研究。既往研究显示Wnt通路在多种组织细胞活化及纤维化中具有关键作用,为此,本实验建立了实验性大鼠脑室出血后慢性脑积水模型,给予铁离子螯合剂去铁敏作对比治疗,动态的观察了大鼠脑积水形成过程中脑脊液铁离子和脑实质铁蛋白含量的变化,以及Wnt信号通路的激活情况,初步探讨了铁离子、铁蛋白、以及去铁敏对大鼠PHCH的影响及Wnt信号通路(Wnt1,Wnt3a)在PHCH发生中的意义。方法:1. 220只SD雄性大鼠随机分为5组,正常对照28 d组( n=15 ),假性IVH组( n=55 )、IVH组( n=55 )、侧脑室注铁离子组( n=40 )、IVH加去铁敏组( n=55 )。2.正常对照28 d组不作处理,正常饲养;假性IVH采用二次注射法侧脑室内注入130μl生理盐水;IVH组以及IVH加去铁敏组采用二次注射法推注130μl非抗凝自体尾静脉血至模型大鼠的侧脑室;侧脑室注铁离子组推注5 ul浓度为6.67 g/L的三氯化铁-人工脑脊液溶液。3.设立术后1、7、及28 d时相点,以前囟后0.4 mm冠状面侧脑室宽度评价脑积水发生情况,采用亚铁嗪法和Elisa铁蛋白试剂盒法检测各时相点脑脊液铁离子含量和脑组织铁蛋白含量,采用RT-PCR和WesternBlot法检测各时相点大脑半球脑组织Wnt信号通路(Wnt1,Wnt3a)激活情况。结果:1.正常组和假性IVH组无脑积水发生。IVH组术后1d可见右侧侧脑室积血并轻度扩张,7d时80%(4/5)的大鼠有脑积水形成,侧脑室可见含铁血黄素沉积,28d脑积水发生率80%(12/15);侧脑室注铁离子组1d即可见侧脑室扩张,28d脑积水发生率73%(11/15);IVH加去铁敏组28d脑积水发生率20%(3/15),显著低于IVH组和侧脑室注铁离子组。2.脑脊液中铁离子含量假性IVH组各时相点与正常组相比没有明显差异。IVH组、侧脑室注铁离子组、IVH加去铁敏组脑脊液铁离子含量均在1d时达到最高,随后逐渐下降。IVH组及侧脑室注铁离子组脑脊液铁离子在各个时相点均高于假性IVH组,而IVH加去铁敏组脑脊液中铁离子含量在各个时相点则较IVH组为低,28d时有显著性差异。大脑半球脑组织中铁蛋白假性IVH组各时相点与正常组相比没有明显差异。在IVH组、侧脑室注铁离子组以及IVH加去铁敏组含量1d后均上调,在7d时达到最高,各个时相点IVH组、侧脑室注铁离子组脑组织铁蛋白含量均高于假性IVH组,在28d时有明显差异,IVH加去铁敏组脑组织中各个时相点铁蛋白含量则始终低于IVH组,28d时有显著性差异。3.正常组和假性IVH组有正常含量的Wnt1和Wnt3a mRNA的表达,假性IVH组mRNA表达随时间没有明显改变。IVH组Wnt1 mRNA表达术后1d即上调,7d时高于相应时相点的假性IVH组,28d时达最高,高于同时相点的假性IVH组。去铁敏干预治疗后,IVH加去铁敏组Wnt1 mRNA含量下降,7d和28d均显著低于相应时相点IVH组。Wnt3a mRNA与Wnt1变化趋势相似,IVH组在7d和28d时较同时相点假性IVH组Wnt3a mRNA的表达均有显著升高。采用去铁敏干预治疗后,IVH加去铁敏组7d和28d均显著低于同时相点IVH组。Wnt蛋白的表达变化同Wnt mRNA的变化相互印证,正常组和假性IVH组均有正常含量的Wnt1和Wnt3a蛋白的表达,假性IVH组蛋白表达随时间没有明显改变。IVH组Wnt1蛋白表达术后出现上调,7d时显著高于同时相点假性IVH组,28d时达到最高,显著高于同时相点假性IVH组。IVH加去铁敏组各时相点均低于IVH组,其中28d时显著低于IVH组。Wnt3a蛋白表达表现出类似趋势,IVH组术后Wnt3a蛋白出现表达上调,28d时显著高于同时相点假性IVH组,去铁敏干预治疗后,IVH加去铁敏组28d时显著低于同时相点IVH组。结论:1.二次穿刺侧脑室注自体血法可以成功制备脑室出血后慢性脑积水动物模型,较好体现脑室出血后慢性脑积水的发生过程,提示脑室出血后,血液以及血液的分解产物-铁离子可能为脑积水的诱因。2.脑室出血后,使用去铁敏治疗可以减少脑室出血后慢性脑积水的发生率。3.脑室出血后慢性脑积水的发生过程中,脑脊液中铁离子和脑组织中的铁蛋白含量明显升高,使用去铁敏后,可以减少脑脊液中铁离子和脑组织中铁蛋白的含量,同时降低脑室出血后脑积水的发生率,提示铁代谢异常可能在脑积水的发生过程中有着重要的作用。4.脑室出血后慢性脑积水的发生过程中,Wnt基因mRNA和Wnt蛋白表达均增强,而在去铁敏对比治疗后,减少脑积水发生率的同时抑制了Wnt mRNA和蛋白的表达增强,提示Wnt信号通路(Wnt1,Wnt3a)可能参与了脑室出血后慢性脑积水的发生以及去铁敏的干预机制。