【摘 要】
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人整合素分子α4是α4β7的共同组成部分,在淋巴细胞归巢和炎症反应中起重要作用.其cDNA全长为3Kb,该文从HL-60细胞中提取mRNA,经逆转录PCR分1.8Kb和1.2Kb两段扩增α4cDNA,用
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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人整合素分子α4是α4β7的共同组成部分,在淋巴细胞归巢和炎症反应中起重要作用.其cDNA全长为3Kb,该文从HL-60细胞中提取mRNA,经逆转录PCR分1.8Kb和1.2Kb两段扩增α4cDNA,用T-载体对PCR产物直接克隆,首先得到1.2Kb片段的阳性克隆株.DNA测序结果显示:其中的一个克隆虽在N端有一错义突变,但分析认为对表达蛋白的抗原性影响不大.将该克隆株中的cDNA亚克隆入pGEX-3X表达载体,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导获得高效表达.SDS-PAGE结果显示,重组蛋白表达量占菌体蛋白的24%,分子量为66KD左右,与理论计算值相符.常规诱导条件下,重组蛋白以包涵形式存在,用Triton X-100和尿素对包涵体进行了纯化,薄层扫描分析纯度达到90%以上.改变诱导条件,可以得到5%左右的可溶性表达蛋白.但经消化处理后,该可溶性表达蛋白常消失.以上工作为α4完整cDNA的获得及其功能的研究做了必要的准备工作.
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