论文部分内容阅读
目的:我们前期发现TRPM7（Transient receptor potential melastatin 7）可促进上皮性卵巢癌细胞侵袭迁移,但其机制尚未阐明。本研究旨在探讨TRPM7通过[Ca2+]i-PI3K/AKT信号轴调控上皮性卵巢癌细胞EMT,进而影响上皮性卵巢癌侵袭转移的作用与分子机制,为上皮性卵巢癌抗转移治疗提供新的分子靶标和新策略。方法:本研究分别在SKOV3及OVCAR3中建立稳定沉默TRPM7表达的上皮性卵巢癌细胞系,采用划痕、Transwell侵袭迁移实验、尾静脉注射裸鼠肺转移瘤实验等方法在体内外考察TRPM7对上皮性卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,通过形态学观察、流式细胞分析术、Western Blot、qRT-PCR等方法考察TRPM7表达改变,或同时抑制胞内钙信号,或给予PI3K/AKT激活剂/抑制剂处理对上皮性卵巢癌细胞EMT相关标志物及钙信号的影响,以及PI3K/AKT信号通路分子表达的影响。结果:1.本研究成功构建了TRPM7稳定沉默的上皮性卵巢癌细胞株。体内、体外显示沉默TRPM7表达后,上皮性卵巢癌细胞的侵袭转移能力明显减弱、EMT改变显著被抑制;使用Fluo-8-AM标记钙离子,激光共聚焦及流式细胞检测技术发现,沉默TRPM7表达可明显减弱细胞内的钙信号。2.本研究使用激光共聚焦及流式细胞检测技术发现钙离子螯合剂BAPTA-AM可以有效阻断SKOV3及OVCAR3细胞内的钙信号,并抑制上皮性卵巢癌细胞侵袭转移。SKOV3及OVCAR3细胞给予BAPTA-AM处理的同时,分别激活或抑制PI3K/AKT信号通路,侵袭迁移实验结果显示抑制（激活）PI3K/AKT信号通路对其分别具有增强（抵消）作用,提示钙信号可以通过PI3K/AKT通路影响上皮性卵巢癌细胞侵袭转移。3.本研究通过BAPTA-AM阻断TRPM7稳定沉默的上皮性卵巢癌细胞中的钙信号,增强TRPM7沉默对上皮性卵巢癌细胞侵袭迁移的抑制作用。4.体内、体外实验显示沉默TRPM7表达可以通过[Ca2+]i影响PI3K介导Akt磷酸化,进而抑制上皮性卵巢癌细胞EMT。结论:1.[Ca2+]i可通过激活PI3K/AKT通路促进上皮性卵巢癌细胞EMT、侵袭转移。2.沉默TRPM7可通过抑制[Ca2+]i-PI3K/AKT信号通路介导的EMT,进而抑制上皮性卵巢癌细胞侵袭转移。