银杏(Ginkgo bilobaL.)为银杏科银杏属多年生木本植物,是我国珍贵的孑遗植物,因叶片富含黄酮类化合物,广泛应用于心脑血管疾病治疗,具有重要的医学价值。但通过叶片提取黄酮的传统方法受地域影响大,过度开发还会导致资源匮乏,具有一定局限。通过植物组织培养生产药用成分,可在维持培养环境稳定的同时筛选利于代谢产物积累的培养条件,是近年来植物药用成分开发利用的重要途径。本研究以中南林业科技大学植物园中南林2号(25年生结果佛手银杏树)为实验对象,以其叶、茎、子叶为外植体诱导愈伤组织,固体培养阶段筛选出黄酮高产细胞系及最佳培养条件后,在悬浮培养阶段添加外源诱导子MEJA和CTS,探究进一步实现银杏黄酮增产的可能性,主要结果如下:1、银杏愈伤组织诱导:以银杏叶片、茎段、子叶为外植体诱导愈伤组织,诱导率表现为:子叶>叶片>茎段,且叶片、子叶愈伤组织较疏松,茎段愈伤组织则较致密。2、银杏愈伤组织继代培养:通过设计正交实验,得出银杏愈伤组织继代中最佳生长组合为:子叶愈伤组织+MS+3 mg/LNAA+1 mg/LKT+5 mg/LVC;最佳抗褐化组合为:叶愈伤组织+MS+1 mg/LNAA+1 mg/LKT+10mg/LVC;最佳黄酮积累组合为:叶愈伤组织+MS+2 mg/LNAA+1 mg/LKT+5 mg/L VC;9个正交处理组中黄酮产量最高组达到6.32mg/瓶,以该处理组愈伤进行悬浮培养,而综合褐化指数,最终选取MS+2 mg/L NAA+1 mg/L KT+10 mg/L VC的培养基组合进行后续实验。3、银杏悬浮细胞系建立:在恒定愈伤组织接种量为3 g/瓶,培养瓶容量为250 mL的基本条件下,通过单因素实验发现:以装液量80 mL,摇床转速110 r/min,光照周期12h/d,培养时间15d的条件下,银杏悬浮细胞黄酮含量最高,同时能保证较好的生长状态。4、外源诱导子对细胞生长及黄酮积累影响:通过在银杏悬浮细胞系中添加不同浓度的诱导子MEJA与CTS,发现MEJA处理组均会显著抑制细胞生长,但一定浓度范围内可以增加黄酮含量,并提高最终黄酮产量,其中MEJA的最佳添加浓度为50μmol/L,15 d时黄酮产量可达369.26 mg/L,是对照的1.22倍;CTS同样会抑制细胞生长,但低浓度范围抑制作用不显著,100 mg/L的CTS可使银杏悬浮细胞15 d时黄酮产量达到502.98 mg/L,为对照的1.66倍。5、外源诱导子对细胞酶活性影响:通过测定外源诱导子添加后,15 d内银杏悬浮细胞系中次生代谢相关酶活性变化趋势,发现MEJA与CTS对银杏悬浮细胞中的黄酮合成关键酶(PAL)和抗氧化酶(SOD、POD、CAT)酶活均有提升作用,其中CTS对PAL与CAT酶活提升效果优于MEJA处理组。而MeJA对SOD与POD活性提升则更显著。