扶正祛毒汤对AML-CR患者CD34+细胞源DC诱导过程中IL-12的影响

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目的:通过扶正祛毒汤干预急性髓系白血病缓解期(AML-CR)患者CD34+细胞源树突细胞(Dendritic Cells,DC)的诱导,观察DC诱导成熟前后血清中白介素-12(Interleukin-12)的变化,并分析其与DC的关系,从而探究扶正祛毒汤诱导DC成熟的机理。  方法:分别以高、中、低剂量的扶正祛毒汤煎剂灌胃新西兰大白兔,第三天后在无菌环境下进行心脏取血,制备高、中、低三种不同浓度的含药血清,采取纳入实验标准患者骨髓,用人淋巴分离液提取单个核细胞,以免疫磁珠阳性选择法提取CD34+细胞,使用Flt-3、IL-3、TPO、SCF细胞因子体外扩增后,以高、中、低剂量扶正祛毒汤含药血清联合细胞因子诱导培养CD34+细胞为DC,收集第0、6、9天上清并观察DC形态,ELISA法测IL-12含量,流式细胞术检测DC表面抗原表达。  结果:  1.DC形态:第0天镜下为CD34+细胞形态,3天后见细胞逐渐聚集成簇,形成集落,细胞表面变得不规则,并出现细毛状模糊突起,6天后胞体变大,细胞膜可见形如树权的突起,与其他树突细胞交织,集落较前增多,第9天后可见形状典型、成熟的DC。含药血清+细胞因子组诱导的DC形态较空白血清+细胞因子组(KB+YZ)、细胞因子组(YZ)典型。  2.IL-12含量:在扶正祛毒汤联合细胞因子诱导CD34+细胞成为DC的过程中,在同一时间段:各含药血清+细胞因子组与KB+YZ、YZ组之间均有差异(P<0.05),其中扶正祛毒汤高剂量+细胞因子组(FQG+YZ)与扶正祛毒汤中剂量+细胞因子组(FQZ+YZ)、扶正祛毒汤低剂量+细胞因子组(FQD+YZ)之间有显著差异(P<0.05),FQZ+YZ组与FQD+YZ组之间无差异(P>0.05),KB+YZ组与YZ组之间无统计学意义(P>0.05)。IL-12的含量随着培养时间延长而增加,各组第9天与第6天之间比较有差异(P<0.05),第9天与第0天比较有差异(P<0.05),第6天、第0天之间相比有统计学意义(P<0.05)。  3.DC表面抗原表达:CD80、CD83、CD86、CD1a、HLA-DR在各组均有表达。CD80在各组中的表达无统计学差异(P>0.05);CD83的表达在含药血清+YZ组与KB+YZ组、YZ组之间有显著差异(P<0.05),KB+YZ组与YZ组之间无显著差异(P>0.05),且在含药血清+YZ组中,高剂量组与中、低剂量组之间有显著差异(P<0.05),中、低剂量组之间无统计学意义(P>0.05);CD86的表达在含药血清+YZ组与KB+YZ组、YZ组之间有显著差异(P<0.05),KB+YZ组与YZ组之间无显著差异(P>0.05),中剂量组与高、低剂量组之间有显著差异(P<0.05);CD1a、HLA-DR的表达在含药血清+YZ组与KB+YZ组、YZ组之间有显著差异(P<0.05),KB+YZ组与YZ组之间无显著差异(P>0.05)。  结论:  1.扶正祛毒汤联合细胞因子能够诱导CD34+细胞源DC的成熟。  2.扶正祛毒汤可诱导DC成熟,并促进DC分泌IL-12。
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