第一部分参附注射液治疗血管性痴呆模型小鼠的作用及机制目的:初步观察探索参附注射液（Shenfu Injection,SFI）对血管性痴呆小鼠（Vascular dementia,VD）的治疗作用,并探索该机制是否与5-脂氧酶（5-lipoxygenase,5-LO）/白三烯（Leukotriene）和一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase,NOS）/一氧化氮（Nitric oxide,NO）通路有关。方法:1.雄性昆明小鼠,体重24-28g,随机分为假手术组、VD模型组、SFI低剂量组(5mL·kg^-1)、SFI中剂量组(10mL·kg^-1)、SFI高剂量组(20mL·kg^-1),每组9只。通过双侧颈总动脉重复夹闭和再灌注以及腹腔内注射硝普钠来复制VD小鼠模型。造模第3天,药物组通过尾静脉注射给予不同剂量的SFI,假手术组和VD模型组给予相同量的生理盐水,记录SFI对VD模型小鼠体重变化。2.水迷宫实验:记录假手术组,VD模型组和低、中、高SFI组小鼠找到平台的时间。3.大脑组织病理变化:实验结束后取小鼠的大脑组织进行病理切片和HE染色,观察大脑组织病理损伤情况。4.ELISA检测假手术组,VD模型组和低、中、高SFI组小鼠血清中白三烯B4（Leukotriene B4,LTB4）和半胱氨酰白三烯（Cysteinyl leukotrienes,CysLTs）含量的变化。5.采用Griess法检测假手术组,VD模型组,低、中、高SFI组小鼠血清中NO含量的变化。6.基因水平分析:q PCR检测假手术组,VD模型组,低、中、高SFI组小鼠海马中5-LO、白三烯A4水解酶（Leukotriene A4 hydrolase,LTA4H）、白三烯C4合酶（Leukotriene C4 synthetase,LTC4S）、诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,iNOS）和神经型一氧化氮合酶（Neuronal nitric oxide synthase,nNOS）mRNA的表达变化。7.蛋白水平分析:Western blot检测假手术组,VD模型组,低、中、高SFI组小鼠海马中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS蛋白的表达。8.免疫组化检测假手术组,VD模型组,低、中、高SFI组小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS在海马中的表达分布。结果:1.造模小鼠苏醒后按照Longa的5分评分标准进行评分,小鼠都在1分（提尾时右前肢内收,不能完全伸直）和2分（行走时向右侧旋转）的评分标准。2.从第二天开始,VD模型组和各剂量SFI组的小鼠活动量和进食量减少;在造模第4天,VD模型组小鼠体重显著低于假手术组（P<0.001）。给药第3天后,与VD模型组相比,各剂量SFI组小鼠体重均有不同程度的升高（P<0.05）,其中以SFI中剂量组体重上升最快。3.与假手术组相比,VD模型组和各用药组小鼠学习记忆时间显著增加,其中VD模型组小鼠所需时间最长。4.HE染色结果显示,假手术组小鼠海马神经元结构完整,细胞层次分明清晰,排列紧密;在VD模型组中,小鼠细胞层次凌乱,海马神经元表现出明显的核固缩;SFI各剂量组小鼠细胞层次凌乱有所减轻,中剂量组最佳。5.与假手术组相比,VD模型组小鼠血清中LTB4、CysLTs和NO的含量明显升高,不同剂量组SFI均能显著的降低VD小鼠血清中LTB4、CysLTs和NO含量（P<0.05）。6.与假手术组相比,VD模型组小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS mRNA的表达明显升高（P<0.05）,而中、高SFI组均能显著性降低小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS mRNA的表达（P<0.05）。7.与假手术组相比,VD模型组小鼠海马中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS蛋白的表达显著增加（P<0.05）,而中、高SFI组均能显著性降低小鼠海马中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS蛋白的表达（P<0.05）。8.免疫组化结果显示,VD模型组小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS蛋白的表达明显升高,而中剂量可以显著降低VD模型组小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS蛋白的表达。结论:1.成功复制VD小鼠模型,其表现出明显的痴呆症状。2.SFI各剂量组均可增加小鼠体重,减轻小鼠痴呆症状,缩短VD模型组小鼠的学习和记忆时间,以及明显减轻小鼠大脑海马的病理损伤,表明SFI对VD模型组小鼠有治疗作用。3.首次显示VD发病机制可能涉及LTB4和CysLTs异常增加,SFI治疗VD的作用与其抑制LTB4和CysLTs合成有关。4.SFI降低VD小鼠血清中LTB4含量与其下调VD小鼠大脑海马组织LTB4合成酶系5-LO和LTA4H基因和蛋白的表达有关。5.SFI治疗VD小鼠的作用与其下调VD小鼠大脑海马组织iNOS和nNOS基因和蛋白的表达,使NO含量保持在合适的浓度有关。第二部分参附注射液对氧糖剥夺损伤PC12细胞的保护作用及其机制目的:初步探索参附注射液对VD离体模型-氧糖剥夺（Oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤PC12细胞的保护作用,探索其是否涉及5-LO/LTs和NOS/NO通路。方法:1.将15、17.5、20、22.5、25mmol·L^-1连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）与PC12细胞共同孵育24h,MTT法检测细胞抑制率,确定Na₂S₂O₄的最佳浓度。2.将50μL/mL、75μL/mL、100μL/mL、125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL、200μL/mL SFI与Na₂S₂O₄诱导的PC12细胞共同孵育24h、48h、72h,通过MTT测定细胞存活率,确定SFI的合适浓度和时间。3.ELISA检测对照组,OGD模型组,SFI 125μL/mL、SFI 150μL/mL、SFI175μL/mL组细胞培养基上清中LTB4和CysLTs含量。4.Griess法检测对照组,OGD模型组,SFI 125μL/mL、SFI 150μL/mL、SFI175μL/mL组细胞培养基上清中NO含量的变化.5.基因水平分析:q PCR检测对照组,OGD模型组,SFI 125μL/mL、SFI150μL/mL、SFI 175μL/mL组细胞中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS mRNA的表达变化。6.蛋白水平分析:蛋白印迹检测对照组,OGD模型组,SFI 125μL/mL、SFI150μL/mL、SFI 175μL/mL组细胞中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS蛋白的表达情况。结果:1.与对照组相比,15、17.5、20、22.5、25mmol·L^-1Na₂S₂O₄剂量组与PC12细胞共同孵育24h均能显著抑制细胞活力（P<0.001）,且20mmol·L^-1Na₂S₂O₄剂量组,细胞抑制率达到47.49±1.85,接近50%。综合考虑,后续实验选择终浓度为20mmol·L^-1Na₂S₂O₄制作细胞模型。2.与OGD模型组相比,50μL/mL、75μL/mL、100μL/mL、125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL、200μL/mL剂量组SFI能够时间剂量依赖性的减轻Na₂S₂O₄对PC12细胞的抑制作用（P<0.05）。150μL/mL剂量组SFI作用于PC12细胞24h后,细胞存活率最高,达到79.75±0.23。综合考虑,后续实验选用125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL剂量组SFI处理Na₂S₂O₄诱导的PC12细胞,作用24h。3.与对照组相比,Na₂S₂O₄诱导的PC12细胞培养基上清中LTB4、CysLTs和NO含量显著增加,SFI能剂量依赖性降低Na₂S₂O₄诱导PC12细胞培养基上清LTB4、CysLTs和NO含量升高。4.与对照组相比,Na₂S₂O₄诱导的PC12细胞中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）。与OGD模型组相比,125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL SFI剂量组细胞5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论:1.20mmol·L^-1Na₂S₂O₄与PC12细胞共同孵育24h,细胞抑制率接近50%,因此本实验选择该浓度孵育24h小时制作离体VD疾病模型。2.125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL的SFI与Na₂S₂O₄诱导的PC12细胞共同孵育24h,能显著提高PC12细胞的存活率,表明SFI对Na₂S₂O₄诱导损伤的PC12细胞具有保护作用。3.SFI对Na₂S₂O₄诱导损伤的PC12细胞的保护作用可能与其降低PC12细胞培养基上清中LTB4和CysLTs生成有关。4.SFI减少Na₂S₂O₄诱导损伤的PC12细胞培养上清LTB4生成与其抑制LTB4合成酶系5-LO和LTA4H基因和蛋白的表达有关。5.SFI对Na₂S₂O₄诱导损伤的PC12细胞的保护作用可能也与其下调iNOS和nNOS基因和蛋白的表达,降低PC12细胞培养上清中NO含量有关。