fus在斑马鱼生长发育中的功能研究

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随着生物基础研究的深入,对基因的功能探究一向是生命科学研究的重要课题之一,不单单是在了解生物发育的现象上具有重要的理论意义,也会影响到生产实践的应用。脂肪肉瘤转运/肉瘤融合蛋白(Fus)是一种参与转录调控与前体mRNA剪切的一种RNA结合蛋白。据先前的实验报道,在哺乳动物中突变FUS会导致神经退行性疾病,包括肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)。然而,关于fus的功能在鱼类中的报道却很少。本研究中,我们以斑马鱼(Danio rerio)作为模式生物,探究fus在鱼类中的功能。斑马鱼fus定位于第3号染色体上,由14059 bp个碱基组成,cDNA长度为1626 bp,共编码541个氨基酸,其编码序列包含RNA超家族识别结构域(RRM superfamily)和锌指家族与包含锌指区的RNA结合蛋白结构(ZnF-RBZ)的两个结构域。基于该基因的功能结构域,我们选取基因组上尽量靠近翻译起始密码子的合适的靶位点,利用近年来广泛使用的CRISPR/Cas9技术在斑马鱼中对fus产生可遗传的等位基因移码突变,通过子代杂交的方式获得纯合的fus突变体。研究结果发现,在斑马鱼幼鱼与成鱼躯体的发育过程中,通过测量fus-/-纯合突变体与对照组的体长与体重,相对于对照组(wide type,WT)野生型斑马鱼来看,发现突变体斑马鱼的体长与体重均有显著减小,但身体发育却无明显异常并且完全可育。除此之外,在野生型斑马鱼中常见的雌鱼身体比例大于雄鱼的性别异形现象在fus-/-纯合突变体中被消除了。进一步研究生长发育信号通路中较为关键的几种生长相关基因,发现gh1,ghra,igf1,igf2a,stat5.1和socs6基因的表达水平在突变体斑马鱼的早期幼鱼发育阶段显著低于野生型斑马鱼。然而,相对于WT,在fus-/-纯合突变体斑马鱼中,其运动能力并未受到影响。本研究表明,不同于它在哺乳动物中的功能,fus在斑马鱼中与运动神经元的发育不相关但在调节鱼类躯体生长发育与两性生长异形方面有着不同的功能。
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