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目的：利用RNA干扰(RNA interfering，RNAi)技术，靶向沉默膀胱癌T24细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）基因的表达，通过将T24细胞培养上清与外周血单个核细胞(Peripheralblood mononuclear cell，PBMC)来源的树突状细胞(Dendritic cells，DC)共培养，来模拟在膀胱癌微环境下，膀胱癌细胞分泌VEGF对DC细胞的发育成熟和免疫功能的影响。同时探讨膀胱癌微环境中的VEGF参与癌细胞免疫逃逸、影响DC抗肿瘤效应的机制，进一步为后续临床上制备DC疫苗治疗膀胱癌提供更全面的实验依据。 方法：实验设置三个组，分别为:感染组、空载体组以及未感染组。构建针对VEGF基因的慢病毒干扰载体LV-VEGFA-RNAi以及无有效干扰序列的空载体慢病毒LV-CON(两种慢病毒载体均带有增强型绿色荧光蛋白)，分别感染各组T24细胞，未感染组不采取任何干预措施。采用荧光显微镜观察感染组及空载体组细胞荧光表达情况，验证感染成功，使用倒置显微镜观察未感染组细胞生长情况。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)以及酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测各组T24细胞VEGF mRNA和蛋白表达，并将各组T24细胞培养上清分别与未成熟DC(PBMC)共培养，采用流式细胞仪检测DC细胞分化成熟指标CD1a、CD83以及免疫功能指标CD86等。采用SPSS17.0软件对数据结果进行统计学分析。 结果：慢病毒干扰载体成功感染膀胱癌T24细胞后对各组均产生了一定的损伤，感染组和空载体组均有一定比例的细胞死亡，可见细胞碎片。与未感染组相比，感染组膀胱癌T24细胞VEGF mRNA及蛋白的表达均受到显著抑制(P＜0.05)，细胞生长变缓。与空载体组相比，感染组膀胱癌T24细胞VEGFmRNA及蛋白的表达亦受到明显抑制(P＜0.05)，细胞生长亦明显变缓。而空载体与未感染组相比，T24细胞VEGF mRNA及蛋白的表达量差异不明显(P＞0.05)。各组膀胱癌T24细胞的培养上清液与未成熟DC共培养之后，感染组中反应DC分化成熟的表型CD1a、CD83及免疫功能表型CD86较未感染组有明显增高(P＜0.05)，较空载体组亦有明显增高(P＜0.05)，而空载体组与未感染组中反应DC分化成熟及免疫功能的表型无明显差异(P＞0.05)。 结论：VEGF是肿瘤微环境中的一个极为重要的免疫抑制因子，而DC是目前发现的体内功能最强，唯一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞(Antigen-presenting cell，APC)，也是肿瘤微环境中的主要抗原递呈细胞，在机体的抗肿瘤免疫反应中发挥极为重要的作用。实验结果表明:膀胱癌T24细胞分泌VEGF，可抑制DC细胞的分化成熟以及免疫功能，这可能与膀胱癌的免疫逃避有关。通过RNAi技术可靶向沉默膀胱癌细胞的VEGF表达，有利于微环境中的DC细胞发育成熟及免疫功能的发挥，可能通过修复DC被损害的免疫监视功能，增加DC细胞的抗肿瘤能力。