胡麻油烟凝聚物致人胚肺二倍体细胞恶性转化作用研究

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目的通过建立人胚肺二倍体细胞体外恶性转化模型,胡麻油烟凝聚物(SOFA)作为受试物重复染毒人胚肺二倍体细胞,观察并检测靶细胞形态变化,生长能力(如失去密度依赖性,失去接触抑制,失去贴壁生长特性等)和生化表型的改变,以及移植于裸鼠体内形成肿瘤的能力;流式细胞术对靶细胞进行DNA含量分析,以检测SOFA对人胚肺二倍体细胞增殖及细胞周期的影响,为研究胡麻油烟对人体潜在的致癌危险性提供实验依据。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及克隆形成试验,观察并检测SOFA(终浓度分别为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)对人胚肺二倍体细胞的毒性作用及其对人胚肺二倍体细胞克隆形成率的影响,观察靶细胞细胞形态、克隆形态变化、SOFA短期诱导人胚肺二倍体细胞发生细胞转化的作用; SOFA重复染毒(染毒24h后,终止染毒48h后,再染毒24h)人胚肺二倍体细胞,以S9混合液作为体外代谢活化系统,表达培养40d,观察靶细胞形态变化、有无转化灶形成;计数Ⅲ型转化灶,计算转化率;对Ⅲ型转化灶进行分离、表达培养4w,取表达培养后的Ⅲ型转化灶细胞进行生物学性状检测、恶性程度测定(ConA凝集试验、软琼脂培养试验),并将转化细胞移植于裸鼠体内,观察其致瘤性;采用流式细胞术对靶细胞进行DNA含量分析,检测SOFA对细胞周期及DNA倍体指数(DI值)的影响,并计算细胞增殖指数PI值,观察SOFA对细胞增殖的影响。结果MTT比色法及克隆形成试验结果显示:SOFA重复染毒人胚肺二倍体细胞后,终浓度为400μg/ml剂量组对人胚肺二倍体细胞生长具有明显的抑制作用,其OD值与DMSO对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),其它剂量组吸光度值虽与DMSO溶剂对照组比较差异无统计学意义,但对细胞增殖均有一定的抑制作用,并呈现一定的浓度依赖效应(r=-0.430,P<0.01);人胚肺二倍体细胞受SOFA重复攻击后,细胞相对克隆形成率(R-CFE)下降5%~75%,且具有明显的剂量反应关系(r=–0.917,P<0.05);靶细胞及克隆形态表现出发生转化的形态学改变。细胞体外恶性转化试验结果显示:实验剂量范围内的SOFA可不同程度诱发人胚肺二倍体细胞形成Ⅲ型细胞转化灶,转化细胞生长失去接触抑制性、饱和密度增大、ConA凝集能力增强、锚着依赖性丧失,并具有裸鼠体内成瘤性等多种细胞发生恶性变的生物学表型改变。流式细胞术DNA含量分析结果显示:实验剂量范围内的SOFA可促进人胚肺二倍体细胞加速分裂,S期比率增高,PI值增高,DNA含量呈现异倍体化趋势,并表现出明显的剂量-反应关系(r=0.914,P<0.01)。结论胡麻油烟凝聚物可诱发人胚肺二倍体细胞发生恶性转化的作用,对裸鼠具有成瘤作用;可引起人胚肺二倍体细胞细胞周期紊乱,导致细胞异常增生,DNA含量异倍体化,对人体具有潜在致癌危险性。
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