类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以慢性关节炎症为特点的全身性自身免疫病,其主要临床表现是关节内软骨和骨的破坏、关节肿胀和关节功能障碍。其中,破骨细胞被证明在RA的关节损害中发挥着关键作用。骨质疏松(osteoporosis)是一种多病因的、以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病,往往存在着OC的骨吸收活性与成骨细胞的骨形成活性之间的失衡。因此,这两种疾病都存在着过强的破骨细胞活性。理论上,以破骨细胞作为靶点的治疗策略,有望为RA或骨质疏松患者带来重大意义。MiR-146a与免疫反应关系密切。MiR-146a的两个靶蛋白：表皮生长因子受体(EGFR)和TNF受体相关因子-6 (TRAF6)在破骨细胞的形成过程中具有重要作用。使用稳定性高的转运系统,使细胞内miR-146a过表达,通过下调EGFR和TRAF6的水平,实现对破骨细胞形成相关的信号通路的微调控,对于RA或骨质疏松的治疗有潜在的应用价值。在本研究中,我们使用人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)作为破骨细胞前体,通过核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-kB ligand, RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-colony stimulating factor, M-CSF)两种细胞因子的刺激促使其向破骨细胞转化；利用大肠杆菌原核表达系统,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropy-p-D-thiogalactoside, IPTG)诱导,获得基于MS2噬菌体的装载miR-146a的重组病毒样颗粒(MS2-miR-146a VLPs);与Tat47-57进行化学交联后,VLPs获得自主穿透细胞膜的能力。用不同剂量的MS2-miR-146a VLPs处理PBMCs后,伴随着细胞内miR-146a的升高,Western Blot检测到miR-146a的两个靶蛋白EGFR和TRAF6的表达水平下降；实时荧光反转录定量PCR提示破骨细胞的四个标志基因：TRAP, PU.1CATK,CA2的表达水平明显下调；通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acidphatase, TRAP)染色,发现破骨细胞的形成数量明显减少；通过与骨片共培养并对骨片上的吸收陷窝进行甲苯胺蓝染色,发现破骨细胞的活性明显受抑。可见细胞内升高的miR-146a发挥了对破骨细胞形成和活性的抑制作用。这种基于MS2噬菌体病毒样颗粒的递送方法简单、高效、生物安全性好,具有良好的应用前景。重组MS2 VLPs介导的miR-146a升高能否在动物水平控制RA软骨和骨破坏、关节炎症或骨质疏松尚有待进一步研究。