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目的:脓毒症是临床危重病人死亡的主要原因,死亡率高达50%-60%。CpG DNA是引起脓毒症的主要病原分子,CpG DNA通过与TLR9结合,介导单核/巨噬细胞的活化并释放TNF-α、IL-6等细胞因子,导致脓毒症、多器官功能衰竭甚至死亡。因此,阻断CpG DNA与其受体的结合被认为是防治脓毒症的关键。临床研究表明:传统中药中含有抗炎活性成分,但由于中药的化学成分复杂,抗炎作用的物质基础不明确,限制了中药在脓毒症中的应用与发展。本课题以CpG DNA为靶点,应用生物传感器技术平台,从78种抗炎中药中定向分离具有拮抗脓毒症作用的活性物质并对其进行生物学活性的评价。方法:(1)应用生物传感器技术、建立以CpG DNA为靶点的筛选抗炎中药的技术平台并对78种中药进行筛选;(2)利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换-HPLC技术,从大黄中定向分离与CpG DNA具有较高结合活性的组分,并对得到的组分进行初步的活性评价,确定活性组分;(3)在体外实验中,测定活性组分与CpG DNA、Lipid A的结合能力,观察活性组分对LPS、CpG DNA刺激小鼠RAW264.7细胞分泌炎症介质的抑制作用;(4)在体内实验中,观察活性组分对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用。结果:(1)建立了以CpG DNA为靶点应用生物传感器筛选抗炎中药的技术平台;78种中药中,地榆、大黄、藏青果等14种中药与CpG DNA具有较高结合能力,鸦胆子、赤芍、地榆等9种中药中与CpG DNA特异性结合的活性成分含量较高;(2)利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换-HPLC等技术定向分离得到与CpG DNA有较高结合活性的组分------大黄D组分;(3)大黄D组分与CpG DNA、Lipid A均具有较高的结合活性,对CpG DNA及LPS刺激小鼠RAW264.7细胞分泌TNF-α有显著的抑制活性,并呈现良好的量-效关系;(4)大黄D组分对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用,并呈现良好的量-效关系。结论:(1)应用生物传感器、以病原分子CpG DNA为靶点,成功地建立了筛选抗炎中药的技术平台;(2)从大黄中分离得到与CpG DNA有较高结合活性的组分------大黄D组分,体内、外生物学活性评价结果显示:大黄D组分对CpG DNA及LPS刺