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目的: 通过观察当归补血汤中的有效活性成分黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AS-Ⅳ)和阿魏酸(Ferulic Acid,FA)的药理活性,对其配伍前后进行药效及抗炎、镇痛作用比较,初步探讨其调控类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)作用的分子机制,探寻当归补血汤防治RA的关键分子靶点。 方法: 1.通过MTT法检测当归补血汤对HFLS-RA的增殖的影响;通过ELISA法检测当归补血汤对HFLS-RA上清液中IL-6含量的影响;通过Western Blot法检测当归补血汤对HFLS-RA中JNK1、JNK1/2蛋白表达水平的影响。 2.通过冰醋酸致小鼠扭体反应的疼痛模型实验,研究当归补血汤的镇痛作用;通过角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型实验,研究当归补血汤的抗炎作用。 结果: 1.当归补血汤对HFLS-RA增殖的影响 ①AS-Ⅳ组:与空白组比较,模型组能够明显促进HFLS-RA的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,AS-Ⅳ组对HFLS-RA的增殖均有一定的抑制作用,其中高剂量组作用最为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。 ②FA组:与空白组比较,模型组能够明显促进HFLS-RA的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,FA组对HFLS-RA的增殖均有一定的抑制作用,其中高剂量组作用最为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。 ③配伍组(AS-Ⅳ+FA):与空白组比较,模型组能够明显促进HFLS-RA的增殖,差异具有显著性统计学意义(P<0.01);与模型组比较,配伍组(AS-Ⅳ+FA)对HFLS-RA的增殖均有一定的抑制作用,其中高剂量组作用最为明显,差异具有显著性统计学意义(P<0.01)。 2.当归补血汤对HFLS-RA中IL-6含量的影响 ①AS-Ⅳ组:与空白组比较,模型组HFLS-RA中IL-6的含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,HFLS-RA中IL-6的含量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。 ②FA组:与空白组比较,模型组HFLS-RA中IL-6的含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,HFLS-RA中IL-6的含量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。 ③配伍组(AS-Ⅳ+FA):与空白组比较,模型组HFLS-RA中IL-6的含量明显升高,差异具有显著性统计学意义(P<0.01);与模型组比较,HFLS-RA中IL-6的含量明显降低,差异具有显著性统计学意义(P<0.01)。 3.当归补血汤对HFLS-RA中JNK1、JNK1/2蛋白含量的影响 AS-Ⅳ组:与空白组比较,模型组JNK1、JNK1/2蛋白含量显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,各组蛋白含量显著减少高剂量组的作用效果最为明显,差异具有统计学意义,(P<0.05)。 4.当归补血汤的抗炎、镇痛作用研究 AS-Ⅳ组、FA组和配伍组(AS-Ⅳ+FA)对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀、冰醋酸致小鼠扭体反应均有一定的抑制作用,其中配伍组(AS-Ⅳ+FA)抑制作用最明显,说明配伍组(AS-Ⅳ+FA)有良好的抗炎、镇痛作用,差异具有统计学意义(P<0.01)。 结论: 1.TNF-α能够明显诱导HFLS-RA增殖; 2.AS-Ⅳ、FA、配伍组(AS-Ⅳ+FA)均可抑制TNF-α诱导的HFLS-RA增殖; 3.AS-Ⅳ、FA、配伍组(AS-Ⅳ+FA)均可降低HFLS-RA中IL-6的表达水平; 4.AS-Ⅳ可降低HFLS-RA中JNK1、JNK1/2的蛋白表达水平。初步推测当归补血汤抑制TNF-α诱导的HFLS-RA增殖作用是通过调控JNK信号通路相关的细胞因子的表达实现。 5、AS-Ⅳ、FA、配伍组(AS-Ⅳ+FA)均有良好的抗炎、镇痛作用。