水曲柳体胚发生技术优化及H2O2和NO作用分析

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水曲柳(F. mandshurica Rupr.)属木犀科白蜡树属,是东北3大硬阔叶树种之一。本文以水曲柳成熟合子胚为外植体,通过研究外源H202和NO对水曲柳体胚发生的影响及对细胞内总死亡量、细胞内H2O2含量和细胞内NO含量的影响,分析其在水曲柳体胚发生和外植体细胞死亡中的作用,探究其在信号网络中的位置;同时筛选进行水曲柳体胚增殖和萌发培养的材料,然后以胚性愈伤组织为继代材料研究成功诱导体胚以后继代次数对体胚增殖和植株再生的影响,分析水曲柳体胚继代过程中的胚性保持能力和植株再生能力,为进行水曲柳种质资源保存提供保障。主要研究结果如下:1.H202和NO在水曲柳体胚发生中均起着重要的作用。适当增加外植体细胞内H202含量促进体胚发生;清除外植体细胞中H202不利于体胚发生和后期发育。增加外植体细胞内NO含量有利于体胚发生和发育,提高体胚质量;减少外植体细胞中NO含量不利于水曲柳体胚发生和发育,降低体胚质量。2.水曲柳体胚增殖培养过程中,4 mm未变绿体胚的直接增殖效果最好。相比直接增殖材料,进行继代增殖培养的最佳材料为愈伤组织。水曲柳体胚增殖系数随增殖继代次数的增加而增加。3.水曲柳体胚萌发培养过程中,4-8mm未变绿体胚的萌发效果最佳。随着增殖继代次数的增加,水曲柳次生体胚的体胚萌发率逐渐降低;随着萌发培养时间的延长,体胚均出现大量的褐化死亡现象。随着增殖继代次数的增加,水曲柳次生体胚的体胚生根率呈现先升高后降低的趋势。4.H2O2和NO作为信号因子共同参与了高浓度蔗糖胁迫诱导的水曲柳体胚发生过程中的外植体细胞死亡过程,NO在信号网络中作为H202的上游信号。H202处理抑制细胞总死亡量,促进细胞内H202含量的生成,促进细胞内NO含量的生成;CAT处理抑制细胞总死亡量,抑制细胞内H202含量的生成,抑制细胞内NO的生成。5.SNP处理抑制水曲柳外植体细胞死亡,抑制细胞内H202的产生,促进细胞内NO的产生;PTIO抑制细胞死亡,抑制细胞内H202的产生,抑制细胞内NO的产生。
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