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目的：观察补肾活血法对体外纯化培养的视网膜Muller细胞在高糖、低剂量AGEs及高剂量AGEs干预条件下的保护作用,并对其作用机制进行初步探讨,为补肾活血法在糖尿病视网膜病变(DR)的临床应用提供一定的实验依据。方法：1.以改进酶消化法培养新生SD大鼠视网膜Muller细胞。2.将纯化的视网膜Muller细胞分别置于高糖(终浓度为50mmol/L)、低剂量AGEs(终浓度为50mg/L)及高剂量AGEs(终浓度为100mg/L)下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、正常中药干预组,高糖组、高糖中药干预组,低剂量AGEs组、低剂量AGEs中药干预组,高剂量AGEs组、高剂量AGEs中药干预组。3.以酶联免疫吸附法(ELISA)对细胞培养上清液进行乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、脯氨酸羟化酶1.2.3(PHD1、PHD2、PHD3)含量的测定；并以聚合酶链法(RT-PCR)测定视网膜Muller细胞HIF-1αmRNA、及VEGFmRNA的表达。SPSS13.0对所得数据进行统计学分析。结果：1.各组中,高AGEs组LDH漏出量及HIF-1α表达量最高,较正常对照组及高糖组明显升高(P<0.05)；高糖及高、低AGEs组的HIF-1αmRNA值均比正常对照组明显增高(P<0.05)；低AGEs组的HIF-1αmRNA表达量最高,较高糖组及高AGEs组明显升高(P<0.05)；补肾活血中药复方含药血清能降低本实验中不同干预条件下视网膜Muller细胞LDH漏出量、减少HIF-1α及HIF-1αmRNA的表达。2.高糖及高、低AGEs组VEGF、VEGFmRNA的表达均比正常对照组明显增高(P<0.05)；补肾活血中药复方含药血清能减少本实验中不同干预条件下VEGF及VEGFmRNA的表达。3.与正常对照组比较,高糖及高、低AGEs组PHD1活性均明显下降(P<0.05)；高、低AGEs组PHD2活性明显增强(P<0.05),而PHD3的活性表达无明显差异。高AGEs组的PHD1活性比低AGEs明显降低(P<0.05)。补肾活血中药复方含药血清能提高高糖条件下PHD1的活性,降低本实验中不同干预条件下PHD2的表达。4.补肾活血中药复方含药血清对正常条件下LDH漏出量、HIF-1α及HIF-1αmRNA、VEGF及VEGFmRNA表达量、以及PHD1、PHD2、PHD3活性均无明显影响(P>0.05)。结论：1.本实验中,短时单纯的高糖干预并未导致体外纯化培养的视网膜Muller细胞通透性以及HIF-1α表达发生明显改变,但可引起视网膜Muller细胞HIF-1α介导缺氧信号通路中HIF-1αmRNA、VEGF、VEGFmRNA的表达明显上调、PHD1活性明显下降。2.本实验中,AGEs(终浓度100mg/L)干预不仅能导致体外纯化培养的视网膜Muller细胞膜的损伤、HIF-1α表达明显增强,而且50mg/L和100mg/L终浓度的AGEs均能引起HIF-1αmRNA、VEGF、VEGFmRNA的表达明显上调、PHD1活性明显下降、PHD2活性明显增强。3.本实验中,在高糖及AGEs不同干预条件对PHD3的活性均无明显影响。4.本实验中,在50mg/L终浓度的AGEs及高糖干预下,视网膜Muller细胞HIF-1α表达增加的调节主要与HIF-1αmRNA表达增强有关；在100mg/L终浓度的AGEs干预下,视网膜Muller细胞HIF-1α表达增加的调节不仅与HIF-1α表达增强有关,还可能涉及到HIF-1α蛋白翻译后水平。5.补肾活血中药复方含药血清可降低高糖以及AGEs条件下视网膜Muller细胞膜通透性,这可能是补肾活血法防治DR的药物干预途径之一6.补肾活血中药复方含药血清能抑制高糖及AGEs条件下视网膜Muller细胞HIF-1α介导缺氧信号通路中HIF-1α、HIF-1αmVEGF、VEGF、mRNA高表达,降低PHD2活性,提高PHD1活性,这可能是补肾活血中药复方含药血清防治DR的另一个重要药物干预途径。7.补肾活血中药复方含药血清对正常条件下体外纯化培养视网膜Muller细胞HIF-1α介导的缺氧信号通路无明显影响。