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长期使用阿片类药物会导致对药物的耐受、依赖和成瘾,但是其机制并未完全阐明。阿片受体的脱敏是耐受发生的重要分子机制之一,脑内基因表达的异常和神经元可塑性改变以及脑结构和功能的损害是产生和维持药物成瘾状态的重要神经和分子基础。 激动剂诱导的G蛋白偶联受体激酶(GRK)对G蛋白偶联受体(GPCR)的磷酸化是受体脱敏的关键步骤。GRK的表达水平可被GPCR的激动剂调节。GRK在体内的异常表达可以严重地影响器官和组织的功能。GRK2和GRK5是介导阿片受体磷酸化的主要亚型,在阿片受体的脱敏中起重要作用。但是,阿片类药物对GRK5的表达调节以及对GRK2在不同脑区内的表达调节还不清楚。c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)是催化转录因子c-Jun磷酸化的主要蛋白激酶。JNK有3种亚型,其中JNK3特异性地分布在脑内,在脑内神经元的损伤和凋亡中发挥着极其重要的作用。吗啡通过JNK信号通路引起免疫细胞的凋亡。长期使用吗啡可引起脑内神经元结构损伤和可塑性发生改变。阿片类药物能否调节脑内JNK3表达,目前尚未见有报道。为此,我们采用原位杂交组织化学的方法,研究了急性、长期给予吗啡和吗啡戒断、纳络酮促戒断以及长时程戒断过程中,大鼠脑内多个脑区的GRK2、GRK5和JNK3三种蛋白激酶mRNA水平的变化。 结果显示,单次注射10mg/Kg吗啡能够上调GRK2和GRK5mRNA在皮层、海马以及GRK2 mRNA在丘脑的水平。每天2次,连续9天给予10mg/Kg吗啡引起吗啡耐受后,GRK2 mRNA水平在皮层、海马、五脑和蓝斑下降;GRK5mRNA水平与生理盐水对照组相比未见有显著变化。吗啡戒断显著升高GRK2和GRK5在多个脑区的mRNA水平。单次和长期给予吗啡,增加皮层的JNK3 mRNA水平,但海马、丘脑和蓝斑的JNK3 mRNA水平未见有明显变化。连续两周的长时程戒断,JNK3 mRNA水平在皮层、海马和丘脑显著升高。再次注射吗啡后,未见对这些脑区升高的JNK3 mRNA水平有明显的影响。此外,我们还比较了GRK2和GRK5mRNA在脑内的分布特征,发现在导水管周围灰质(PAG)两者的基因表达明显不同,表现为GRK5 mRNA在此区域内分布较GRK2 mRNA广泛,GRK5 mRNA阳性细胞灰度高于GRK2的mRNA阳性细胞。 我们的研究首次发现,阿片类药物能够在转录水平调控GRK的基因表达;单次和长期给予吗啡以及吗啡戒断对GRK mRNA水平的调节不同;GRK2和GRK5mRNA在PAG的分布不同;阿片类药物可以调节JNK3的基因表达;急性和长期复旦大学博士论文 吗啡对 GRKZ。GRKS和 JNK3基因在大鼠脑内表达调控的研究给予吗啡增加 JNK3 InRNA在皮层的水平,而未见海马、丘脑和蓝斑的 JNK3mRNA水平发生改变,但长期吗啡戒断却引起海马和丘脑:17NH3 tYlxrvA水平迟发性升高。我们的结果提示,阿片类药物对G见基因表达的调控,能够反过未影响阿片受体的信号转导。吗啡增加 GIEUC的基因表达可能在急性吗啡耐受中起作用。长期给予吗啡可以负性调节或抑制GRK的基因表达。吗啡戒断时GIUL基因超表达对于减弱戒断过程中多种GPCR过度激活具有重要的意义。吗啡对WK3基因表达的上调在吗啡成病和吗啡引起的脑内神经细胞损伤中起重要作用。在PAG,GRKS较G抓二可能发挥重要的功能。