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第一部分正常大鼠肝脏祖细胞的分离和鉴定目的：探讨正常大鼠肝脏祖细胞的分离和和鉴定方法。方法：选择正常Wistar大鼠，以CD90.1为标志物，通过免疫磁珠法分离正常肝脏内的祖细胞，应用免疫组织化学和PCR对所分离细胞的标志物进行鉴定。结果：CD90.1阳性细胞占肝脏非实质细胞的0.32%，流式细胞仪分析CD90.1阳性细胞占分离所得细胞的98.2%。刚分离的CD90.1阳性细胞，OV-6阳性，CK-19呈强阳性，HNF-4a呈阴性。结论：正常大鼠肝脏内存在祖细胞标记的细胞。第二部分正常大鼠肝脏祖细胞的体外培养和诱导分化目的：探讨将从正常大鼠肝脏内分离的祖细胞进行体外培养，并诱导其向肝细胞方向分化的技术。方法：将正常大鼠肝脏内分离的CD90.1阳性细胞，使用含有不同浓度HGF的培养液，通过噻唑蓝(MTT)比色法观察肝脏祖细胞的增殖情况，通过IHC和实时定量RT-PCR观察肝脏祖细胞的分化情况。结果：原代培养时，使用50ng/ml HGF的培养液，肝脏祖细胞生长良好，培养至3周左右形成形态完整的细胞集落。传代培养时，使用30ng/ml HGF的培养液中，细胞生长、分化良好，培养至8周，细胞增大至正常肝细胞大小。免疫组化分析提示，刚分离的肝脏祖细胞，CK-19、AFP呈强阳性，HNF-4a、ALB呈阴性；培养至8周，CK-19、AFP呈阴性，HNF-4a、ALB呈现强阳性。实时定量RT-PCR检测表明，刚分离的肝脏祖细胞，CK-19、AFP mRNA表达程度较高，HNF-4a、ALBmRNA几乎无表达；培养至8周，CK-19、AFP mRNA几乎无表达，HNF-4a、ALB mRNA表达水平较高。结论：正常大鼠肝脏内的祖细胞可以在体外培养增殖，并通过诱导分化为具有肝细胞标记的细胞，HGF在此过程中发挥重要作用。第三部分HGF/c-Met相关信号通路在大鼠肝脏祖细胞增殖中的作用目的：探讨HGF/c-Met相关信号通路PI3K/AKT、STAT3和ERK1在大鼠肝脏祖细胞增殖中的作用。方法：肝脏祖细胞进行体外原代培养时，实验组培养液中加入选择性C-Met磷酸化抑制剂Su11274，应用MTT比色法检测细胞增殖能力变化，通过实时定量RT-PCR和Western blot观察PI3K/AKT、STAT3和ERK1的mRNA和蛋白表达水平变化。结果：Su11274浓度为2μM，肝脏祖细胞增殖开始出现明显减缓。实验组和对照组c-Met、PI3K、AKT、 STAT3和ERK1mRNA都有表达而且表达水平无明显差异。对照组c-Met蛋白在培养第6d开始上调，在第6d、8d、10d、12d、14d分别为1.250.29、1.560.22、1.590.30、1.610.27、1.600.28；p-c-Met蛋白第6d、8d、10d、12d、14d分别为0.820.25、1.160.27、1.150.24、1.150.29、1.160.22。实验组c-Met蛋白与对照组相比无统计学差异（P=0.71）；p-c-Met蛋白第8d、10d、12d、14d分别为0.450.12、0.360.10、0.220.08、0.130.03，与对照组相比明显下调（P=0.026）。实验组和对照组PI3K、AKT蛋白表达无明显变化（P=0.65，P=0.73）实验组p-PI3K蛋白第10d、12d、14d分别为1.360.14、1.280.15、1.140.14；p-AKT蛋白第10d、12d、14d分别为0.360.11、0.310.09、0.220.11，与对照组相比存在差异（P=0.033，P=0.014）。对照组STAT3蛋白表达在第6d、8d、10d、12d、14d分别为0.530.14、0.490.13、0.430.12、0.420.10、0.430.11。实验组STAT3蛋白表达在第6d、8d、10d、12d、14d分别为0.520.13、0.470.11、0.420.09、0.400.12、0.410.10，与对照组变化相似（P=0.73）。对照组p-STAT3蛋白第6d、8d、10d、12d、14d分别为0.220.11、0.180.06、0.130.05、0.130.07、0.130.05，实验组p-STAT3第6d、8d、10d、12d、14d分别为0.220.08、0.170.05、0.150.05、0.110.07、0.060.02，两组存在差异（P<0.001）。对照组ERK1蛋白，在培养的第6d表达水平开始上调，第6d、8d、10d、12d、14d分别为0.670.12、0.730.16、0.760.15、0.780.12、0.820.13，实验组ERK1蛋白表达变化与对照组一致（P=0.57）。对照组和实验组p-ERK1蛋白表达均从第6d开始增加，两组相比无统计学差异（P=0.81）。结论：PI3K/AKT、STAT3可能是肝脏祖细胞的增殖阶段HGF/c-Met的相关下游信号。