第一部分Cx43在膀胱尿路上皮癌组织中的表达目的:探讨膀胱肿瘤组织及癌旁组织标本中Cx43基因及蛋白表达有无变化。方法:随机选取2014年6月至2015年9月间,承德医学院附属医院泌尿外科膀胱癌开放手术患者膀胱癌组织52例及32例癌旁组织,用免疫组化的方法检验膀胱癌组织和癌旁组织中Cx43蛋白的变化。从上述标本中选取了12对膀胱肿瘤组织(tumor组)及其癌旁组织(control组),通过RT-PCR和免疫印迹方法检测两组中Cx43的m RNA和蛋白的变化。通过免疫组化结果与临床病理资料结合分析Cx43与肿瘤的相关性。结果:1.膀胱肿瘤组织中Cx43在基因和蛋白水平的表达明显较癌旁组织中高(P<0.01)。2.免疫组化显示Cx43主要定位于胞浆中,肿瘤组织中染色明显较癌旁组织强(P<0.05)。3.临床病理分析提示,高表达的Cx43往往联系着高级别膀胱癌(P<0.05)结论:Cx43在膀胱肿瘤组织中表达增加且与高级别的膀胱肿瘤有关。第二部分Cx43在膀胱癌细胞中对顺铂抗肿瘤作用的影响研究目的:探讨利用RNA干扰技术沉默膀胱癌5637细胞株Cx43蛋白的表达对顺铂化疗敏感性的影响。方法:体外培养膀胱癌5637细胞和正常尿路上皮SV-HUC-1细胞,采用蛋白质印迹法检测膀胱癌5637细胞系和正常尿路上皮SV-HUC-1细胞中Cx43蛋白的表达,应用免疫荧光技术检测膀胱癌5637细胞系中Cx43蛋白的定位。利用RNA干扰技术沉默膀胱肿瘤5637细胞株Cx43蛋白的表达并用顺铂(3ug/ml)处理Si RNA-Cx43组(实验组)和Si RNA-Control(对照组)后,通过CCK-8检测实验组、对照组及野生型5637细胞的增殖情况;利用流式细胞术检测两组癌细胞的凋亡;利用蛋白质印迹法检测顺铂处理后野生型5637细胞后细胞中Cx43、Cleaved caspase-3的表达及实验组和对照组中Cx43、Cleaved caspase-3和Bcl-2的表达。结果:膀胱癌5637细胞中的Cx43表达较正常尿路上皮细胞高(P=0.019),免疫荧光检测Cx43定位主要在细胞质中。CCK-8结果显示:膀胱癌5637细胞随着顺铂药物的浓度(0.75ug/ml、1.5ug/ml、3ug/ml、6ug/ml)和时间(0天、1天、2天、3天)的增加,细胞的增殖减少;Si RNA-Cx43组增殖较Si RNA-Control组明显减少,差异有统计学意义,F=9.949,P=0.02。流式细胞仪检测结果显示,实验组和对照组凋亡率分别为(63±4.58)%和(34.33±6.03)%,差别有统计学意义,P<0.01。蛋白质印迹结果显示,5637细胞随着药物(顺铂3ug/ml)作用时间增加,Cx43蛋白的表达逐渐降低,(P<0.001),而Cleaved caspase-3逐渐升高。顺铂(3ug/ml,4h)处理实验组和对照组后,实验组和对照组相比Cleaved caspase-3明显升高(P=0.001),而BCL-2较对照组降低(P=0.005)。结论:沉默膀胱癌5637细胞中Cx43蛋白表达能提高顺铂的敏感性,可能与反常定位于细胞质中的Cx43参与线粒体介导的凋亡途径有关。第三部分Cx43通过激活MAPK通路促进膀胱肿瘤细胞的进展目的:探讨过表达Cx43和敲低Cx43对膀胱肿瘤5637细胞的作用及相关机制。方法:在膀胱肿瘤5637细胞上建立过表达Cx43稳定株。应用CCK-8实验方法检测Cx43过表达组及对照组的增殖能力,利用流式细胞术方法检测器细胞周期和凋亡情况,免疫印迹检测MAPK相关蛋白变化。利用si RNA干扰Cx43在肿瘤细胞中的表达,利用上述方法予以确认。结果:通过CCK-8实验显示,过表达Cx43组的增殖能力较对照组明显增加(P<0.01),而小干扰实验组则表现相反的结果(P<0.01)。流式细胞术检测发现,过表达Cx43组中肿瘤细胞凋亡明显低于对照组,但在小干扰实验组中,敲低Cx43表达可戏剧性的增加凋亡的比例。细胞周期实验显示,敲低Cx43的表达可以使细胞周期阻滞在G2-M期。免疫印迹显示:Cx43的过表达能激活MAPK信号途径,增加JNK和ERK的表达,尤其是磷酸化后的水平,而敲低Cx43后则出现与之相反的结果。结论:Cx43蛋白表达的改变可影响肿瘤细胞的增殖和凋亡,其机制可能与MAPK信号调控有关。