流动注射型酶传感器测定蔬菜中西维因农残的方法研究

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氨基甲酸酯类农药是目前蔬菜、粮食等作物中使用最广泛的农药种类之一。随着病虫害抗药性的逐年增加,农药用量越来越大,施药次数更加频繁,使农药残留问题更加突出。因此,建立和完善快速、便捷的农药残留多样品分析技术,增加农药残留检测方法的多样性,意义重大。在前人研究的基础上,对西维因农药残留快速检测方法进行了研究。氨基甲酸酯类农药能抑制动物体内胆碱酯酶(Cholinesterase,ChE)的活性,在一定条件下,ChE的活性变化与该类农药的浓度存在良好的相关性,从而通过测定农产品的农药残留提取液对ChE酶活力的影响即可判定农药残留的情况。本文从酶的固定及酶学性质研究、流动注射分析系统的组装及测定过程的条件优化、农残样品的检测等方面进行了研究,结果如下:1.通过固定化条件的比较研究,以6.0%的海藻酸钠为载体,1.2%的的普鲁卡因胺为吸附剂,将海藻酸钠与普鲁卡因胺按照7:1的比例加入到柠檬酸缓冲液(pH=7.5)中,同时滴加0.5%的牛血清白蛋白,在38℃水浴中海藻酸钠融化后,与浓度为20%的酶混合,滴加到20g/L的氯化钙溶液中,轻微搅拌,室温下放置8h;过滤,用柠檬酸缓冲溶液(pH=7.5)洗涤2~5次,加入到1.2%的戊二醛溶液中,在35℃条件下交联60min,再用柠檬酸缓冲溶液(pH=7.5)洗涤2~5次,研究结果表明,固定化酶活性良好,与游离酶相比,固定化酶的热稳定性和对酸碱度的稳定性显著提高。2.通过研究流动注射型酶传感器检测农药残留,实验发现,在控制样品流速(抑制时间)为0.6ml/ min、底物浓度控制在80mmol·L-1、酶柱采用Φ6×40mm时,传感器运行良好,具有较好的重现性(RSD=1.016,n=7),西维因浓度在0.2~146.8μg/ml范围内有良好的抑制效果,抑制率与农药残留的浓度成正比。对样品做回收率实验,测得的数据与HPLC法检测的结果基本一致。3.通过该法制备的传感器,可重复利用性好,用柠檬酸盐缓冲液冲洗固定化酶柱30min,或者用高浓度的底物冲洗固定化酶柱15min,进行酶活力测试,数据显示,酶基本复活。
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