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本论文对一株产溶菌酶的海洋芽孢杆菌进行了选育、鉴定和发酵条件优化的研究,为海洋微生物溶菌酶的研究和应用奠定了基础。
以一株产溶菌酶的海洋芽孢杆菌S-12-86为出发菌株,对其进行原生质体的制备和再生。结果表明原生质体的最佳制备条件为:以菌株S-12-86培养18h,采用溶菌酶液与菌液1:1配比,溶菌酶浓度为1.0mg/mL,在35℃下,酶解30min,原生质体形成率为97.6%,再生率为23.6%。将此条件下获得的原生质体于30W紫外灯下80cm照射120s进行诱变处理。诱变处理后初筛复筛,并结合产酶性能稳定性分析,获得了一株产溶菌酶活性比原始菌株提高46.8%且性能稳定的突变菌株YJ007。
对筛选出的高产菌株YJ007进行其形态观察和部分生理生化指标的测定以及系统发育学分析。结果表明,该菌株具有典型的芽孢杆菌属的形态学特征;YJ007的16SrDNA序列在GenBank的注册号为EU016215,与BacilluslicheniformisDSM13T(X68416)同源性高达99.68%,确定为地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)。
采用单因素实验对突变株YJ007的产酶条件进行了研究,得到其最佳培养基成份:玉米粉、蛋白胨、牛肉膏、NaCl、MgSO4;最佳培养条件:初始pH值为7.5,温度为30℃,转速为200r/min,接种量为6%,接种时间为18~20h,发酵培养时间为20~22h。在此基础上采用二次回归正交设计对突变株YJ007的发酵培养基进行了优化。得到理想最优培养基条件:玉米粉0.200%、蛋白胨0.773%、牛肉膏0.132%、NaCl0.320%、MgSO40.759x10-5mol/L。