目的研究RAS激活物2(RAS protein activator like 2,RASAL2)对宫颈癌HeLa细胞生长增殖和侵袭转移的影响及其作用机制,为探讨RASAL2对宫颈癌HeLa细胞的调控机制奠定实验基础。方法1、体外培养宫颈癌HeLa细胞。2、构建过表达质粒GV40-myc-RASAL2。人RASAL2全长序列扩增,GV40-myc-RASAL2真核表达载体的构建和鉴定。3、基因转染:采用转染试剂LIP3000将RASAL2基因转入HeLa细胞中。实验分为未转染组、空载体转染组、RASAL2基因转染组。4、MTT法检测过表达RASAL2对HeLa细胞增殖的影响。5、划痕实验检测过表达RASAL2对HeLa细胞迁移的影响。6、Western blotting法检测RASAL2、上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经型钙粘蛋白(N-cadherin)、SNAIL、ZO-1、WEE1和CCNB1的蛋白表达。7、免疫荧光共定位证实RASAL2和WEE1在宫颈癌HeLa细胞中是否存在共定位。结果1、GV40-myc-RASAL2重组质粒鉴定:PCR鉴定和测序分析表明GV40-myc-RASAL2重组质粒构建成功。2、基因转染技术过表达RASAL2:与未转染组相比,空载体转染组RASAL2蛋白表达无明显区别(p>0.05),GV40-myc-RASAL2转染组RASAL2蛋白表达明显升高(p<0.01)。表明RASAL2基因转染成功。3、MTT结果:GV40-myc-RASAL2转染组HeLa细胞增殖率在24 h、48 h和72 h明显少于GV40空载体对照组和空白对照组(p<0.01)。4、划痕实验结果:与空白对照组相比,RASAL2基因转染组明显抑制HeLa细胞的迁移(p<0.01)。5、Western blotting结果:与GV40空载体转染组和空白对照组相比,RASAL2基因转染组E-cadherin蛋白表达增加,N-cadherin、SNAIL和ZO-1蛋白表达减少。同时,过表达RASAL2,WEE1和CCNB1蛋白表达增多(p<0.01)。6、免疫荧光共定位结果:RASAL2和WEE1在宫颈癌HeLa细胞中主要共定位在细胞核内。结论本研究结果表明RASAL2抑制HeLa细胞增殖和迁移,提示RASAL2可能参与宫颈癌的发生发展;其机制可能与RASAL2和WEE1相互作用有关。