用于单胺类神经递质检出的新型分析方法的研究和应用

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单胺类神经递质,如多巴胺、羟色胺、肾上腺素、去甲肾上腺素等,是一类非常重要的神经递质,它们直接参与多种生理活动、与人体的健康密切相关,研究发现过量的单胺类神经递质能够产生大量的活性氧物质从而引起神经细胞凋亡,因此准确灵敏的检测单胺类神经递质对于我们了解精神疾病的发病机理以及药物在体内的作用机制非常必要。近年来,化学修饰电极以其高的检测灵敏度以及选择性被广泛应用于分析研究中,如化学修饰电极应用于直接电化学检测;化学修饰电极与一些分离技术如,毛细管电泳、高效液相色谱等相结合用于结构相似物质间的同时分离分析中;其中毛细管电泳化学修饰电极安培检测法具有样品用量少、操作简单、分析速度快、灵敏度高等优点,已经被广泛应用于药物分析、食品分析、生命科学研究等领域。本论文以单胺类神经递质作为研究对象,建立了快速、灵敏、准确、选择性检测多巴胺的化学修饰电极直接电化学检测技术;采用毛细管电泳电化学检测体系结合化学修饰电极研究了四种单胺类神经递质在修饰电极上的电化学行为,并将该方法用于大鼠脑匀浆液中递质含量的检测,讨论了噪音刺激对大鼠不同脑区神经递质含量的影响;毛细管电泳电化学检测(CE-ED)结合场放大样品堆积技术研究了高盐含量的生物样品中递质的含量,通过优化有机溶剂的含量、进样时间、进样高压等达到很好的检测效果,并将该方法用于人体尿样以及大鼠脑内渗析液中递质含量的分析研究中。全文共分为四个部分:1绪论(第一章)本部分内容主要包括神经递质概述,神经递质的分离分析方法的研究进展。文中简要介绍了电化学分析方法在神经递质研究中的应用,化学修饰电极的构筑方法,纳米材料、聚合膜材料等电极修饰材料的研究现状,以及修饰电极与毛细管电泳分离技术结合在神经递质研究中的应用。2基于钛硅分子筛/Au-Pt纳米粒子/Nafion修饰电极的构筑及其对多巴胺电催化性质的研究(第二章)本论文中,以钛硅分子筛(Ts-1)、HAuCl4、H2PtCl6, Nafion,成功构筑了钛硅分子筛-Au-PtNPs/Nafion修饰电极,并研究了DA在该修饰电极上的电化学行为。首先,通过滴涂法将钛硅分子筛修饰到玻碳电极表面;然后在含有0.12mMHAuCl4和0.04mM H2PtCl6的0.5mol/L H2SO4溶液中以电化学聚合法,在-1.0V采用恒电位扫描法制得钛硅分子筛-Au-Pt NPs/修饰电极,最后再采用滴涂法将Nafion组装到电极表面制备钛硅分子筛-AuPt NPs/Nafion修饰电极,通过SEM对该修饰电极表面进行了物理形貌表征。并通过循环伏安法研究了该修饰电极对DA的电催化行为,实验发现,该修饰电极对DA具有良好的电催化氧化作用,同时Nafion对DA具有选择透过性,该修饰电极能够高灵敏度地选择性检测DA。3毛细管电泳-MWCNT聚多巴胺Pt纳米修饰电极对噪音刺激下大鼠脑内四种单胺类神经递质含量变化的研究(第三章)利用多巴胺在空气中容易被氧化这一性质,与MWCNT在常温下反应,生成聚多巴胺包裹的MWCNT (MWCNT@Pdop),通过滴涂法将MWCNT@Pdop修饰到电极表面,制得MWCNT@Pdop修饰电极;在lmmol/LH2PtCl6的0.5mol/L H2SO4溶液中以电化学聚合法,在-0.2V-1.0V范围内循环扫描制备MWCNT@Pdop/Pt NPs修饰电极。通过SEM、TEM等方法研究了Pt纳米粒子的大小、分布以及对该修饰电极的表面的物理形貌。以电化学方法研究了该修饰电极的电化学性质,实验发现该修饰电极对四种单胺类神经递质具有良好的催化氧化作用。我们将该修饰电极用于毛细管电泳-电化学检测四种单胺类神经递质,研究发现该修饰电极有效地提高了毛细管电泳分离分析四种物质的灵敏度。将该检测技术应用于噪音刺激模型下大鼠脑匀浆液中递质含量的检测,研究发现噪音刺激前后递质含量发生了明显的变化,预计该方法在生命科学、临床医学等方面的研究具有良好的应用前景。4场放大样品堆积结合毛细管电泳Pt/MWCNT@Pdop修饰电极安培检测法分析尿样以及渗析液中四种单胺类神经递质(第四章)生物体内单胺类神经递质的分析检测对于临床医学、生命科学的研究具有重要意义。由于生物体内盐的浓度非常高,因此严重影响了单胺类神经递质的直接检测,本文中我们采用场放大样品堆积法以及化学修饰电极相结合来提高毛细管电泳检测的灵敏度,通过选择合适的有机试剂、有机试剂的浓度、进样时间以及进样高压等方面优化分离检测的条件。实验中以Pt/MWCNT@Pdop修饰的碳圆盘电极为工作电极,采用毛细管电泳安培检测法(CE-ED)分析人体尿样以及大鼠纹状体渗析样品中单胺类神经递质的水平。最佳分离检测条件为:运行液为0.18mol/L pH5.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液;进样电压与分离电压均为15KV;进样时间为20s;乙腈的最佳百分含量为80%;检测电位为1.0V。在最佳分离检测条件下,5-HT、DA、NE、E四种物质在15mmin内得到分离,该方法成功用于分析人体尿液以及大鼠脑渗析液中四种物质的分析研究中。
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