1996年,首次从广东分离到H5N1亚型高致病性禽流感(HPAI)病毒(GS/GD/1/96),2004年1月,H5N1亚型HPAI在大陆地区爆发,2006年1月,我国开始实施大规模强制免疫政策。2007年Alexander DJ提出“禽流感(AI)流行病学已发生革命性的变化”,表现在H5N1亚型HPAI发生频度、传播范围、对宿主致病力的改变,以及感染人等方面。2008年,FAO将中国列入H5N1亚型HPAI已确立(entrenched)国家名单。至目前,我国仍时有家禽和人感染H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)的报告。在过去的10年中,大陆地区H5N1亚型HPAI流行病学是否改变?有哪些改变?这些改变对疫病的防控策略和措施有哪些影响?CNKI和PUBMED文献检索表明,在过去10年中,关于大陆地区H5N1亚型HPAI流行病学的文章占比低于2%,集中在环境、野禽,以及人感染的风险因素研究,都未能回答这些问题。因此,本文开展了以下系列研究,以期更为深入的了解当下H5N1亚型HPAI分布特点和风险因素,探索中小规模禽场的防治关键点,为更为经济高效的防治H5N1亚型HPAI提供基础数据和技术支持。1基于GIS技术的中国大陆地区H5N1亚型HPAI流行特征研究过去10年间,H5N1亚型HPAI对中国大陆地区造成了巨大的经济损失,并严重威胁公共卫生安全。为深入理解H5N1亚型HPAI在大陆地区的流行特征,研究结合统计和GIS技术对2004年至2013年6月的H5N1亚型HPAI疫情、监测和流调数据进行了系统分析。结果表明:强制免疫结合扑杀的综合防治措施,在降低高致病性禽流感流行率和发病率方面取得了良好成效;鸡仍是HPAIV的主要侵袭对象;疫情分布与长江、黄河两个主要水系分布无统计学关联(P>0.05);回归分析表明,三次曲线方程:y=79.2-33.869-4.833x2-0.222x3的拟合优度最高(R2=0.975),二次曲线方程:y=60.117-16.943x+1.163x2的拟合优度其次(R2=0.91),均可用于基于时间序列的发病趋势预测;养殖规模与疫情分布可能存在关联。研究提示,在家禽-野禽、市场-家禽界面的H5N1亚型HPAI监测应进一步加强。2 2006-2012年H5N1亚型HPAIV血凝素遗传进化分析。为进一步了解近年来H5N1亚型HPAIV在大陆地区的具体分布和演化情况,研究选取了 2006年-2012年流行病学调查中分离到的454株H5N1亚型禽流感病毒,结合病毒分离的时间、地点和宿主等背景材料,进行血凝素(HA)基因和氨基酸序列的遗传演化分析,发现:2006-2009年,在我国的禽群中主要流行2.3.4和7分支病毒,从2010年至今,2.3.2分支的病毒一直占据着优势;各进化分支在不同的宿主间具有倾向性,2.3.2分支病毒在鸭群中分别更加广泛,7分支病毒几乎全部分离自鸡群;2.3.2分支在我国分布较为广泛,2.3.4分支病毒起源于我国的华南地区,近些年来北方地区也有流行,7分支病毒在我国的北方地区分布广泛,相邻省份不同分支病毒的分布较为相似;2009年以后各分支毒株裂解位点处序列规律性较强,P1-P5位均为RRRKR,P6位存在比较明显的差异,2.3.2和2.3.4的大部分毒株P6位缺失,7分支为G,2.3.2和7分支部分毒株P8位存在R-I的突变;糖基化位点分析表明,第23、193和286位糖基化位点相对比较保守,不同分支的毒株在第72位、140位、154位、163位、236和273位具有比较明显的糖基化位点差异化的特征;受体结合位点分析表明,226和228位等关键位点处均为禽源特征。研究提示野禽迁徙和家禽及其产品的贸易在H5亚型HPAIV传播中起重要作用。3中国大陆地区易感家禽卫生状况及HPAI潜在风险研究研究1、2的结果显示,家禽养殖规模、家禽及其产品流通是H5N1亚型HPAI发生潜在风险因素。本研究系统整理了 2000-2012年畜牧业年鉴数据,2007-2011年的定点和专项调查数据,结合安徽和辽宁2省份的家禽卫生状况调查数据,采用描述性统计方法,分析2000年以来大陆地区的家禽饲养量及规模化程度变化,区域分布特征、家禽场的生物安全防护能力、活禽交易及市场卫生状况,以期进一步了解我国易感家禽养殖分布特点,分析其对我国高致病性禽流感疫情发生和传播的潜在影响。研究发现,H5N1亚型HPAI集中爆发对家禽养殖有明显的影响;2004-2010年,家禽养殖结构虽在发生变化,但变化不明显;2010年后,出栏量和饲养量年增幅均比存栏量年增幅高,家禽养殖规模化层度提高;养殖场的饲养管理水平与疫病防治能力与饲养规模呈正相关,存栏在500-10000羽的养殖场的商业化程度高,但疫病防治意识和能力低,应是HPAI的防治重点和难点;活禽调运以鸡为主,流入量中本省内的调运约占80%,活禽市场的管理规范的只占4%,较为规范的只占28%。研究结果提示,根据养殖规模实施分类管理,推进养殖结构调整,改进市场和流通监管是HPAI防治措施调整的重点。4家禽养殖场户禽流感发病风险因素的Meta分析家禽养殖场户是H5N1亚型HPAI防治的基本单元,为了解家禽养殖场户H5N1亚型HPAI发病的风险因素,研究采用Meta分析方法,在PubMed、Wiley、Elsevier和Springer数据库交叉检索到的125篇文献中,按照设定标准筛选出关于家禽养殖场户禽流感(AI)发病风险因素的15篇文献,进行定量综合分析。结果表明,15篇文献中提及的圈养、开放水源、临近养殖场感染、外来人员进入、病死禽无害化处理,消毒措施、混养、养殖人员卫生等因素中,仅有开放水源(OR=2.89)、临近养殖场感染(OR=7.39)和混养(OR=1.90)与家禽养殖场户AI发生的关联有显著性。研究探索性的将养殖场类型和样本含量作为异质性的影响因素进行了分层分析,发现只有散养户家禽混养(OR=2.76)与AI的关联性有统计意义。研究结果提示,开放水源、临近养殖场感染和散养家禽混养对养殖场场户防治AI具有一定的普遍意义,对大中型家禽养殖场、小型家禽养殖场和散养户应实行分类管理。5安徽、云南等6省份养殖场户H5N1亚型HPAI风险因素研究研究1、3结果提示,中小规模养殖场户是H5N1亚型HPAI发病的高风险群,研究4结果显示不同地域、不同类型养殖场的发病风险因素存在一定差异,为进一步了解在实施强制免疫政策的情况下,我国中小规模养殖场现况和AI风险,研究首次根据地区分布,选取云南、安徽等6省份的96个散养户和中小规模养禽场,通过问卷调查、采样检测相结合的方式,对中小规模养殖场的养殖现状进行了调查,采用回顾性非匹配病例-对照研究方法,分析场(户)水平上的H5N1亚型HPAI风险因素。调查表明,存栏500羽以上饲养场多以盈利为目的,中小规模场家禽调运频繁,平均每周至少有1次产品调运,饲养管理方式与2006年相比没有大的改变,且不受地域影响,疫苗和药物自购现象普遍;单因素和多因素logistic回归分析结果表明,场户水平上H5N1亚型HPAI风险因素包括:周边是否有养殖场(OR=11.980,95%CI:1.177-121.920)、是否有湖泊(OR=14.036,95%CI:1.664-118.397),保护因素包括车辆受限(OR=0.090,95%CI:0.010-0.808)、监督(OR=0.076,95%CI:0.009-0.647)、和消毒频次(OR=0.187,95%CI:0.045-0.781);经Negelkerke决定系数、H-L检验及ROC曲线验证,模型Logit[P(Y=1)]=-0.069+2.483X1+2.642X7-2.412X18-2.578X27-1.678X31拟合效果较好,可用于养殖场户水平H5N1亚型HPAI发生趋势预测。提示进一步加强饲养防疫条件审核,提升中小规模养殖场的饲养管理能力,将有助于降低中小规模养禽场的发病风险,提升养禽业的整体疫病防控能力。6 H5N1亚型HPAI防治措施评估与改进研究为了解现行防治策略措施与当前的形势、技术和机构执行能力是否匹配,研究参考FAO/WHO推荐的防治策略,设计我国H5N1亚型HPAI防治策略和措施评估指标体系和评分方法,指标体系包括防治计划、技术储备、信息交流、流行病学能力、实验室能力等11大项共38个指标。每一指标采用4等级模式划分,根据累计分值进行半量化评价。结果显示,预防与应急准备得分63.9分,应急处置得分为66.7分,家禽生产恢复与促进得分80分,表明H5N1亚型HPAI防治较为完善,但仍有待加强。综合研究1-6的结果,提出了下一个阶段我国H5N1亚型HPAI防治技术路线和防治措施调整建议,提出我国H5N1亚型HPAI防治应实施区域化防治策略,通过生物安全隔离区的建设等措施,逐步退出免疫,提升监测方案的科学性和监测系统的敏感性,调整扑杀范围,制定扑杀补偿机制。