本实验以建立和完善螺旋藻的遗传转化操作系统为目标，研究螺旋藻在液体和固体培养条件下对Amp（氨苄青霉素）的敏感度，确定筛选压力Amp的浓度；克隆报告基因luxAB片段，与含有Ubil启动子基因及amp基因的载体大片段连接重组，构建新的穿梭质粒载体；并对螺旋藻受体细胞进行预处理，抑制核酸酶活性，采用电击转化法将构建的新质粒载体转化螺旋藻细胞Amp对钝顶螺旋藻A9藻株有较强抑制作用，液体培养时Amp对螺旋藻的最低抑制浓度为100μg·ml-1；固体培养时Amp对螺旋藻的最低抑制浓度约为200μg·ml-1。Amp适合作为螺旋藻的抗性筛选压力，筛选压力为200μg·ml-1。　　 本实验选择合适载体质粒pUCΩGUS，使用EcoRⅠ和SmaⅠ双酶切载体质粒pUCΩGUS获得目的载体大片段（含有Ubil启动子基因及amp抗性基因），琼脂糖凝胶电泳回收目的载体大片段；根据质粒pRL1063a中luxAB基因的碱基序列设计引物，在引物上下游分别加入EcoRⅠ酶切位点和SmaⅠ酶切位点，以线型质粒pRL1063a为DNA模板（SaIⅠ酶切），采用PCR（聚合酶链式反应）体外扩增目的标记基因片段luxAB，琼脂糖凝胶电泳纯化PCR产物，双酶切（EcoRⅠ和SmaⅠ）PCR产物，利用凝胶回收试剂盒回收标记基因片段luxAB；在T4 DNA连接酶的作用下将载体大片段和luxAB基因片段进行体外连接重组，构建带有luxAB报告基因的新型穿梭质粒载体pUCΩluxAB；用氯化钙法制备大肠杆菌MC4100A感受态细胞，采用热激法将重组的穿梭质粒载体pUCΩluxAB转化宿主E．coli MC4100A细胞，培养宿主细胞，胞内扩增重组的质粒载体pUCΩluxAB；酶切鉴定重组质粒；重组的质粒载体pUCΩluxAB转化表达宿主细胞，加反应底物癸醛观察表达结果。　　 本实验成功获得含有Ubil启动子基因及amp基因的载体大片段，有效地体外扩增目的标记基因片段luxAB，成功将载体大片段和luxAB基因片段进行体外连接重组，酶切鉴定初步证明重组的穿梭质粒载体pUCΩluxAB构建成功。　　 在低于最适生长温度的条件下（24℃）培养螺旋藻A9藻丝体；用2mmol·L-1的EDTA预处理、培养24h；利用超声波对螺旋藻A9藻丝体进行处理，功率为300W，处理时间为70s；采用电击转化方法，将重组质粒转化螺旋藻A9细胞。　　 本实验电击转化螺旋藻细胞的脉冲时间为5.0ms、电场强度为4kv·cm-1；电击缓冲液为无菌的含0.5 mol·L-1蔗糖（渗透压稳定剂）的1.0 mmol·L-1HEPES（pH7.5）；电击转化的对象为对数生长期中期的螺旋藻细胞。