论文部分内容阅读
本文研究了鲑鱼降钙素前体多肽(sCTGly)在毕赤酵母中的分泌表达。首先将合成的目的基因直接克隆入分泌表达载体pPIC9K,然后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经过组氨酸缺陷筛选和抗生素G418高拷贝筛选,以及摇瓶表达筛选,获得了高水平表达菌株GS115-sCTGly。酶联免疫活性分析表明摇瓶表达量在10mg/L以上。经5升发酵罐发酵优化,使表达量提高到200mg/L以上。分离纯化后的样品经质谱分析表明,sCTGly降解严重,纯化不能获得完整的sCTGly。
本文接着进行了sCTGly基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因融合表达。通过组氨酸缺陷筛选,荧光强度筛选,以及摇瓶表达筛选,获得高水平表达菌株GS115-GFP-sCTGly。5升发酵罐高密度发酵后上清经蛋白电泳,活性分析,荧光检测,以及蛋白免疫印迹检测表明融合蛋白GFP-sCTGly确实分泌到上清中,表达量在50mg/L左右。通过Ni柱纯化,获得融合蛋白GFP-sCTGly,纯度在80﹪以上。