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葡萄球菌肠毒素(Staphyloccucal enterotoxins,SEs)是由葡萄球菌产生的一类耐热性好、稳定度高的可溶性胞外毒蛋白,可引发人类多种免疫疾病。葡萄球菌肠毒素通过潜在的胃肠毒素及超抗原两种机制发挥其毒性作用,诱导炎性反应,但其致炎机制的分子细节尚不清楚。论文克隆表达了几种免疫相关表面分子,并分析了其分子特性及结构,研究了几种重组新型肠毒素对免疫细胞表达相关免疫分子的影响,评价了这些分子表达变化与葡萄球菌肠毒素致炎症的关系。分别以猪T、B、PBMC、PAM细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增6种猪免疫相关表面分子CD28、CD25(T细胞),CD86(B细胞),IL17A(PBMC),MHC I、MHC II(PAM细胞),克隆至克隆载体pUC T simple获得6种猪免疫相关基因。测序结果显示,6种分子与GenBank/NCBI已登陆序列同源性高于95%。编码蛋白序列一级结构预测表明,除IL17A为胞外蛋白外,其余5种分子均存在跨膜域;CD28、CD86、MHC I、MHC II均含一个Ig结构域,CD25包含两个重复的补体控制蛋白结构域。对6种分子糖基化位点、抗原表位以及磷酸化位点预测,应用于后期6种分子信号通路的研究。通过生物信息学分析软件对6种猪免疫相关表面分子蛋白特性进行分析,分别以6种克隆的分子质粒为模板,构建了缺失信号肽或跨膜域的重组表达质粒pET28a-CD28、pET28a-CD86、pET28a-CD25、pET28a-IL17A、pET28a-MHC I、pET28a-MHC II。构建的pET28a-X系列重组菌经诱导表达、包涵体蛋白纯化,获得高纯度的重组蛋白CD28、CD86、CD25、IL17A、MHC I、MHC II。对6种重组蛋白亚细胞分布和三级结构进行预测,同源模建了几种葡萄球菌肠毒素与猪MHC II分子互作的分子细节,分析其对不同肠毒素超抗原活性的影响。设计了猪肠道上皮细胞上的趋化因子及其相应受体CXCL2、CXCL8-CXCR2;MCP-1-CCR2;CCL25-CCR9、CCL28-CCR10、CXCL10-CXCR3,以及6种猪免疫相关表面分子的特异性检测引物,运用相对荧光定量PCR的方法,检测了SEs体内外刺激后各类分子转录水平变化。SEs体外刺激猪IEC、PBMC、PAM细胞后,趋化因子及其受体均在48 h或72 h时表达量上调,表明SEs刺激可引发细胞表面趋化因子分泌,募集表达其相应受体的免疫细胞,引发炎性反应;而体内刺激变化趋势不定,特别是SEs体内刺激后,PBMCs和PAM细胞表面相应趋化因子及其受体表达受抑制;SEO体内刺激后,CD28、CD25、IL17A、MHC II转录水平显著提高,其他肠毒素作用不明显,可能与机体内免疫系统多元、多向、时空调控的复杂性有关。