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消毒试验的指标微生物,应易于培养和检测、生长稳定、形态典型、对消毒因子的抵抗力在同类微生物中有代表性、对人畜无毒或弱毒。在消毒与灭菌效果评价中,指标微生物分为细菌繁殖体、分枝杆菌、细菌芽胞、真菌、病毒等。其中由于病毒试验要求高、培养时间长,特别是部分病毒还不能人工培养,因此,寻找病毒替代指标微生物一直受到广泛的关注。噬菌体是细菌的病毒,由核酸和外膜蛋白两部分组成。噬菌体的生物学特性与甲型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒相似,对消毒剂的抗力与致病性肠道病毒相似,检测方法较病毒简便,且对人不致病,因此噬菌体值得作为病毒污染和病毒灭活指示物进行研究。
在消毒和防护效果的评价指标中,需要一种既能代表病毒对常用消毒处理的抗力,又容易操作,对人安全无害的指标微生物。本课题主要通过悬液定量病毒灭活试验,研究比较了三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株对外环境和三氯异氰尿酸溶液中有效氯的抗力,并以T7噬菌体为指标毒株,观察了含氯消毒剂浓度、作用时间、有机干扰物和温度等因素对灭活病毒效果的影响。主要结果总结如下:
1.三种噬菌体与脊髓灰质病毒I型疫苗株对外环境抗力的比较
为了解噬菌体对外环境的抵抗力,采用悬液和载体定量试验方法,对F2噬菌体、T4噬菌体、T7噬菌体在干燥环境和潮湿环境中的抗力进行了观察,并与脊髓灰质炎病毒作平行比较。结果,在温度20℃、相对湿度8%-14%的干燥环境中,布片上脊髓灰质炎病毒-1型疫苗株,于生物安全柜中放置2h,病毒滴度下降5个对数值;f2噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体在同样条件下放置72h其滴度分别下降1.98、3.43、2.83;在干燥的布片上,三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株的存活时间的长短顺序为:f2噬菌体>T7噬菌体>T4噬菌体>脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株(PV-1)。在模拟潮湿环境的标准硬水中存放14d,F2、T4、T7噬菌体下降的对数值依次为3.67、0.44、0.05,脊髓灰质炎病毒下降对数值为1.72;三株噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株的存活时间的长短顺序为:T7噬菌体>T4噬菌体>脊髓灰质病毒I型疫苗株(PV-1)>f2噬菌体。结论,三种噬菌体和脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株在干燥或潮湿条件下均呈随时间延长其滴度逐渐下降:在干燥环境中滴度下降速度明显快于潮湿环境;以T7噬菌体对干燥和潮湿环境耐受力最强。
2.三种噬菌体与脊髓灰质病毒Ⅰ型疫苗株对三氯异氰尿酸消毒剂抗力的比较。
试验结果表明,三种噬菌体与脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株,对三氯异氰尿酸消毒剂的浓度系数(η值)由大到小的顺序为:f2噬菌体>T4噬菌体>T7噬菌体>脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株;在三氯异氰尿酸溶液中的有效氯含量为200mg/L时,各指标毒株的抗力由大到小顺序为:f2噬菌体>T4噬菌体>T7噬菌体>脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株,其速度常数(K值)的顺序由小到大为:f2噬菌体消毒剂浓度>灭活时间>灭活时间*小牛血清含量>消毒剂浓度木小牛血清含量;温度、消毒剂浓度与灭活时间之间的交互作用对结果的影响无显著性意义。4个因素对T7噬菌体灭活效果的影响程度依次为小牛血清的含量、消毒剂的浓度、灭活时间和温度。
本课题通过对f2噬菌体、T7噬菌体、T4噬菌体与脊髓灰质炎病毒作平行比较,得出如下结论:T7噬菌体不仅在外环境中生存能力最强,而且对三氯异氰尿酸溶液中有效氯的抗力与脊髓灰质炎病毒的抗力相当,基本上符合消毒试验标准菌株应具备的条件,只是有机干扰物对T7噬菌体的灭活效果影响较大。