论文部分内容阅读
目的:本实验旨在通过不同浓度的姜黄素、丝裂霉素及两药联合作用对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制、细胞周期、诱导凋亡及NF-KB活化情况的影响,并对姜黄素、丝裂霉素及两药联合对肺癌细胞的体外作用及可能的产生效应的机制进行初步的探讨,以期寻找新的化疗药物及化疗增敏剂,为临床治疗中进一步提高肺癌的化疗效果并减轻化疗副作用提供理论和实验依据。方法:取体外培养至对数生长期的人肺腺癌A549细胞进行实验。依据实验分组用单药或联合分别处理细胞,MTT法检测不同分组药物对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制率,倒置显微镜下观察不同分组药物对细胞的形态学影响;流式细胞术检测不同分组细胞的细胞周期阻滞情况及凋亡率;通过酶标并借助于NF-KB试剂盒检测不同分组药物对人肺腺癌A549细胞NF-KB活化的影响。结果:1.姜黄素、丝裂霉素单独用药对人肺腺癌A549细胞增殖的影响姜黄素、丝裂霉素分别单独作用于人肺腺癌A549细胞,均可以抑制细胞的增殖,且具有时间依赖性和浓度依赖性,即随着作用时间的延长和药物浓度的增加,其对细胞的增殖抑制作用逐渐增强。2.不同浓度的姜黄素和丝裂霉素对人肺腺癌A549细胞形态学的影响姜黄素与丝裂霉素在较小剂量作用于人肺腺癌A549细胞时,从形态学方面观察,细胞的死亡主要以诱导凋亡为主,表现为细胞贴壁较差,形态变圆;较大剂量作用时,细胞多数表现为坏死的形态学改变,镜下可见细胞内空泡并有大量坏死的细胞碎片。3.姜黄素与丝裂霉素联合用药对人肺腺癌A549细胞增殖的影响0.0625mg/L的丝裂霉素分别与5、10、20、40、80umol/L的姜黄素联合用药,联合用药对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用明显强于单独用药组(p<0.01),联合用药时,随着姜黄素浓度的增加,抑制作用逐渐增强,随着联合作用时间的延长,抑制作用亦明显增强。4.姜黄素、丝裂霉素及联合用药对细胞凋亡及细胞周期的影响两药联合作用于人肺腺癌A549细胞诱导细胞凋亡的作用明显大于丝裂霉素组大于姜黄素组,与对照组比较差异显著(p<0.01)。20μmol/L姜黄素、0.125mg/L的丝裂霉素分别作用于人肺腺癌A549细胞48小时后,与对照组相比较,均表现为G0/G1、G2/M期阻滞(p<0.01),抑制细胞增殖。20μmol/L的姜黄素与0.125mg/L的丝裂霉素联合作用于人肺腺癌A549细胞48小时后,与对照组、单药组相比较,均表现为G0/G1、G2/M期阻滞(p<0.01),抑制细胞增殖。除此之外,联合用药组的细胞凋亡率比单药组在明显增加(p<0.01)。5.姜黄素、丝裂霉素及两药联合作用对NF-KB活化的影响本实验证明姜黄素与丝裂霉素分别单独作用其均可抑制NF-KB的活化。姜黄素与丝裂霉素对NF-KB活化的抑制作用差异较小,无统计学意义(p>0.05)。两药联合对NF-KB的活化有明显的抑制作用,且明显强于单独用药组(p<0.01,p<0.01)。结论:实验表明,实验各组浓度的姜黄素与丝裂霉素单独作用于人肺腺癌A549细胞均具有增殖抑制及诱导凋亡的作用,且具有明显的时间依赖性和浓度依赖性。两药联合作用对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用明显大于单独用药组(P<0.01)。其可能是通过抑制NF-KB的活化的机制来实现诱导细胞凋亡的。