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第一部分MiR-183在肝癌中的表达水平及其临床意义MicroRNAs (miRNAs)是一种内源性、非编码的小分子RNA,在肿瘤组织中异常表达,并且在肿瘤的发生发展过程中发挥类似癌基因或抑癌基因的作用。在肝癌的研究中发现,miRNA在肝癌组织中异常表达,miRNAs的表达水平与肝癌患者的临床病理因素相关,可能成为新的肝癌患者诊断和预后评估的指标。目的：在本实验室前期研究结果显示,miR-183在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)异常表达。然而,miR-183在良性肝病到HCC过程中表达水平的变化及其与临床病理因素的联系尚不明确。本实验旨在研究miR-183在各种肝病中的表达水平,探讨miR-183与临床病理因素的联系及其在肝癌诊断和预后评估中的价值。方法：应用TaqMan qRT-PCR方法检测健康对照组(n=21)、肝炎组(乙型肝炎或丙型肝炎)(n=10)、肝硬化组(n=18)、肝癌及其癌旁组织(n=92)中miR-183和U6的表达水平；以2-△△cT法计算miR-183相对表达量。结果：MiR-183在健康对照组、肝炎组、肝硬化组、癌旁组及HCC组的相对表达量分别为1.254(0.415～2.592),2.825(1.964～4.670),2.249(0.868～4.821),4.121(1.684～11.179),9.373(2.761～29.437)；MiR-183在HCC组的表达水平高于癌旁组、肝硬化组、肝炎组和健康对照组(P=0.001,P<0.001,P=0.011,P<0.001respectively),肝炎组、肝硬化组和癌旁组之间无明显差异。HCC患者癌组织miR-183的表达状况与年龄、性别、乙肝、丙肝、child分级、AFP水平、肿瘤数目、肿瘤大小、血管侵袭及病理分级无明显相关性(P>0.05),与患者TNM分期(P=0.042)和是否伴有肝硬化(P=0.025)相关。Kaplan-Meier生存分析显示：miR-183与肝癌患者术后生存时间无明显相关。多因素Cox回归模型分析显示肝癌的生长方式(P=0.007)和血管侵犯(P=0.008)是肝癌患者预后独立危险因素,而miR-183与肝癌预后无关。ROC曲线分析组织miR-183区别肝癌和其他组(健康对照、肝炎和肝硬化)的价值：曲线下面积为0.808,敏感性为59.8%,特异性为91.8%；结论：MiR-183可能参与肝癌的发生和发展过程,但是与肝癌患者预后无明显相关。MiR-183是否可以作为肝癌的诊断标志物有待进一步研究。第二部分肝病患者血清/血浆miRNA检测方法的探讨MiRNAs可以在血清/血浆中稳定表达,能够耐受反复冻融、异常PH环境和高温等恶劣条件。在不同疾病状态下/／血浆miRNA差异表达,并且具有组织特异性,这些特征是血清/血浆miRNA可能成为新诊断标志物的基础。目的：探讨肝病患者血清/血浆niRNA检测方法,为进一步研究血清/血浆miRNA作为肝病诊断标记物提供方法学依据。方法：采用miRcute miRNA提取试剂盒提取健康人血清/血浆各21例,肝炎患者血清/血浆各19例,肝硬化患者血清/血浆各12例,肝癌患者术前血清/血浆各19例；以miRNeasy serum/plasma试剂盒提取肝癌患者术前血清/血浆各19例；利用分光光度计检测血清/血浆miRNA的提取效果,以实时荧光定量PCR技术检测U6和niR-183的表达水平。以2-△△cT法计算miR-183相对表达量。结果：MiRNeasy试剂提取效果(血清和血浆标本260nm下的吸光度、260nm与280nm(260/280)比值、260nm与230nm(260/230)比值、U6和miR-183)均优于miRcute试剂,差异有统计学意义(P值均小于0.05),两种试剂盒提取标本的扩增曲线CT值均小于35；健康对照组和肝硬化组血浆U6含量高于血清(P=0.000,P=0.011)；肝炎组血清U6含量有增高趋势,但差异无统计学意义(P=0.312)；而肝癌组血清miRNA含量高于血浆(P=0.022)；血清MiR-183在健康对照组、肝炎组、肝硬化组和肝癌组的相对表达量分别为2.06(0.271-4.429)、4.427(1.580-5.372)、5.203(0.751-18.472)和2.534(0.332-10.885)。各组之间差异无统计学意义(P值均大于0.05)。血浆MiR-183在健康对照组、肝炎组、肝硬化组和肝癌组的相对表达量分别为1.738(0.455-3.722)、8.202(4.138-20.591)、1.241(0.577-8.073)和33.081(24.606-86.759)。肝癌组miR-183相对表达量高于健康对照、肝炎组和肝硬化组,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.008,P=0.000)；以ROC曲线分析血清/血浆miR-183鉴别肝癌组与其他组(健康对照组、肝炎组和肝硬化)的诊断价值。血浆样本ROC曲线下面积为0.837,95%置信区间为0.713-0.961,Cutoff值为3.955,敏感性和特异性分别为78.9%和81.0%。血清标本ROC曲线下面积为0.662,95%置信区间为0.488-0.835,Cutoff值为4.272,敏感性和特异性分别为57.9%和76.2%。结论:MiRNeasy serum/plasma试剂盒提取血清/血浆miRNA优于miRcute miRNA提取分离试剂盒,但两种试剂提取的标本均可用于血清/血浆miRNA提取。血浆miRNA诊断肝癌的特异性和敏感性优于血清,miRNA,建议选取血浆为标本。