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目的1.观察ALA-红光-PDT对体外培养人皮肤成纤维细胞形态及增殖活性的影响,探讨在体外条件下模拟ALA-红光-PDT嫩肤的合适处理参数。2.观察ALA-红光-PDT对成纤维细胞自噬的影响,初步探讨ALA-红光-PDT嫩肤可能的机制。方法1.5-氨基酮戊酸(ALA)孵育成纤维细胞后,予以不同时间的红光照射成纤维细胞,光学显微镜下观察细胞形态学变化。2.以不同浓度的ALA孵育成纤维细胞后以不同剂量照射成纤维细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖活性的变化。3.ALA-红光-PDT处理成纤维细胞后,聚合酶链反应(PCR)法检测自噬相关基因LC3及Beclinl mRNA的表达情况。4.ALA-红光-PDT处理成纤维细胞后,MDC染色法检测细胞内自噬泡的变化。结果1.ALA+红光10min组细胞照射后形态无明显改变；ALA+红光20min和ALA+红光30min组细胞照射后细胞出现变形,皱缩,死亡。2.红光照射时间为20min时,ALA浓度为0.25mmol/l组细胞与对照组比较细胞活性无明显变化(P>0.05)；ALA浓度为0.5mmol/1、1.0mmol/l及2.0mmol/l组细胞增殖活性明显下降(P＜0.05)。ALA孵育浓度为1.0mmol/l时,红光照射时间为5min及10min组细胞与对照组比较增殖活性无明显变化(P>0.05)；红光照射时间为15min、20min、30min组细胞增殖活性明显下降(P<0.05)。3.ALA-红光-PDT处理成纤维细胞后,随着时间延长,LC3和Beclinl mRNA水平逐渐升高,24小时达到高峰,48小时出现回落(P<0.05)；与对照组比较,ALA+红光组成纤维细胞LC3和Beclinl mRNA水平明显升高(P<0.05)。4.与对照组比,ALA+红光组成纤维细胞内自噬泡明显增多(P<0.05)。结论1.ALA-红光-PDT在低剂量时对成纤维细胞的增殖活性无明显影响,而在相对高剂量是则可使成纤维细胞增殖活性显著下降。2.ALA-红光-PDT可促进成纤维细胞自噬活性增强,这可能是其嫩肤的机制之一。