论文部分内容阅读
目的: 通过动物体内实验,探讨Testin基因的过表达对非小细胞肺癌 A549细胞裸鼠移植瘤的作用。 方法: 1.构建Testin基因过表达载体和空载体,运用慢病毒转染技术转染非小细胞肺癌细胞株( A549细胞),通过嘌呤霉素筛查出稳定表达的Testin基因过表达细胞株(A549-Testin-OVER)及相应的稳定表达空载体的细胞株(A549-Control); 2.分别通过半定量PCR及Western B1ot实验检测A549-Testin-OVER细胞中的Testin过表达效果; 3.以皮下注射的方式分别将细胞A549-Testin-OVER、A549-Control、未处理A549细胞种植于裸鼠体内,饲养过程中观察裸鼠生长情况,平均每周两次测量肿瘤的长宽径,计算肿瘤的体积,绘制肿瘤生长曲线图。5周后,处死裸鼠,取得肿瘤,进行称重,评估Testin的过表达对成瘤性的影响; 4.通过免疫组化染色分析Testin蛋白在A549-Testin-OVER、A549-Control、未处理A549三组中的表达。 结果: 1.Testin基因过表达载体和空载体成功转染入A549细胞,嘌呤霉素筛选后得到稳定表达细胞株,经半定量PCR及Western Blot实验证实A549-Testin-OVER过表达效果良好; 2.在动物实验中,注射A549-Testin-OVER细胞组在裸鼠体内成瘤时间明显迟于A549-Control、未处理A549细胞组,并且生长速度也是慢于两组对照组,形成的肿瘤小于对照组; 3.A549-Testin-OVER组肿瘤中Testin蛋白的阳性率(98.32±1.76)%要明显高于 A549-Control组(22.92±21.46)%和未处理的A549组(20.14±22.54)%(P<0.05),而两组对照组间无明显差异(P>0.05)。 结论: 作为抑癌基因,Testin基因能明显抑制非小细胞肺癌细胞的成瘤以及生长。