牛结核病（Bovine Tuberculosis）是由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的一种感染动物和人的慢性细菌性疾病。牛分枝杆菌是结核分枝杆菌复合群的成员,这个复合群中的各个菌之间拥有相同的16S RNA和超过99.9%的基因组相同序列。在链球菌和金黄色葡萄球菌等为数不多的致病菌中,有非限制性核酸内切酶核酸酶研究的相关报道,但在结核分枝杆菌复合群中还未见报道。RV1677（亦即RV1677）蛋白作为结核分枝杆菌的的一种分泌蛋白,具有硫氧还蛋白的功能,是否还具有其他生物学功能还是未知。本研究通过生物信息学分析,初步认为该蛋白具有核酸酶活性。而且,通过大量的实验已经证明了RV1677蛋白具有DNA酶活性,为Mg2⁺依赖的核酸内切酶。该蛋白核酸内切酶活性的发现有可能为结核病致病机理研究奠定基础。本研究以结核分枝杆菌标准株H37RV基因组为研究对象,利用Genbank中已有的基因组信息设计引物PCR克隆RV1677基因,所获得的目的片段分别连入原核表达载体pET-22b和真核表达载体pEGFP-N1中。通过大肠杆菌表达系统获得了RV1677蛋白的表达产物并将其纯化。将纯化产物进行了质谱验分析,确定了所得蛋白为预期蛋白且蛋白匀质化程度较好可用于性质分析。利用纯化的RV1677蛋白,制备了兔源的多克隆抗体,作为该蛋白的研究工具,以便于利用免疫学的方法对其功能进行探索。而后,对RV1677蛋白进行了一系列的生化性质及酶学性质的活性验证实验。同时,将该基因连入真核表达载体,使其与绿色荧光蛋白融合表达,重组质粒转染Hela细胞,在激光共聚焦显微镜下进行了亚细胞层次的观察,对RV1677所引起的细胞生理反应做了初步的研究及分析,为进一步深入研究该蛋白对分枝杆菌致病性的贡献奠定了基础。本研究的实验结果表明,RV1677蛋白具有非限制性核酸内切酶活性,为一种多功能性重要蛋白（还具有蛋白硫氧还蛋白活性）。通过对纯化后的重组表达RV1677蛋白的酶学活性实验证实,其对质粒DNA、PCR产物、小牛胸腺DNA以及细菌基因组DNA都具有很好的核酸酶降解活性,在pH6.5、反应温度37℃和Mg²⁺作为辅助因子的条件下酶活性最佳;该RV1677蛋白在70℃时仍能够发挥核酸酶的降解功能,具有很强的耐热活性。将RV1677基因转染于真核表达体系后,发现其在Hela细胞中引起了细胞的多极化现象,并具有降解细胞染色体的能力。这些实验结果提示,RV1677蛋白作为结核分枝杆菌的一种分泌性核酸酶,可能与细胞免疫关系密切,作为一种毒力因子而存在,对RV1677蛋白进行深入的研究还将有助于丰富我们对分枝杆菌感染和发病机理的理解。