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体脂沉积过度从细胞生物学角度讲是脂肪细胞数目增多和体积增大所致,从脂代谢角度讲是脂肪合成能力增强而脂解作用相对降低。因而抑制脂肪细胞增殖分化和提升脂肪细胞本身的代谢活力是防止肥胖发生的重要途径。
本实验以3~7日龄健康长白猪为实验动物,以培养的前体脂肪细胞为研究对象,采用MTT比色、油红0染色提取法、甘油三酯含量分析、甘油含量分析和半定量RT-PCR等方法,研究了具有潜在减肥降脂作用的绿茶茶多酚中生物活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对猪前体脂肪细胞增殖分化及脂解作用的影响。得出如下研究结果:
1.分析EGCG对猪前体脂肪细胞增殖的影响。MTT比色结果表明,100μmol/L和200μmol/L的EGCG抑制前体脂肪细胞的增殖(P<0.05),抑制效果随EGCG作用浓度的升高而增强;5μmol/L和50μmol/LEGCG对增殖的影响与对照组相比差异不显著。
2.研究EGCG对猪前体脂肪细胞分化的作用。采用油红0染色提取法检测了EGCG对猪前体脂肪细胞分化的影响,5μmol/L的EGCG对猪前体脂肪细胞分化不产生影响,50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L的EGCG以剂量依赖性显著抑制前体脂肪细胞的分化;测定脂肪细胞中甘油三酯的含量分析EGCG对脂肪细胞充脂效率的变化,结果以5μmol/L的EGCG对照组相比差异不显著,50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L的EGCG可使脂肪细胞的充脂效率降低(P<0.05),抑制作用呈剂量依赖性;不同分化时期以200μmol/L的EGCG处理细胞,利用半定量RT-PCR检测了EGCG对猪前体脂肪细胞分化转录因子C/EBPα和PPARγ2转录水平表达的影响,结果表明在分化的初期和中期EGCG可下调C/EBPα和PPARγ2的表达,而分化晚期则对其mRNA表达量不产生影响。
3.研究EGCG对猪脂肪细胞分化脂解作用的影响。培养液中甘油释放量测定以5μmol/L和50μmol/L的EGCG对猪前体脂肪细胞脂解作用不产生影响,100μmol/L和200μmol/L的EGCG以剂量依赖性显著促进猪脂肪细胞的脂解作用;半定量RT-PCR检测EGCG对调控脂肪分解关键酶HSL及TGH基因转录水平表达的影响,成熟脂肪细胞中各浓度EGCG处理均对TGH转录水平表达无影响,200μmol/L的EGCG可使HSL转录水平表达量降低。