弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生原虫，能引起人兽共患的弓形虫病。由于弓形虫生活史复杂，传播途径多样，对弓形虫的治疗，特别是弓形虫包囊，迄今尚未有理想药物。因此弓形虫疫苗已成为弓形虫病防治研究的重点。 为构建表达弓形虫SAG1基因的重组伪狂犬病病毒，本研究利用PCR技术扩增弓形虫主要保护性抗原基因SAG1，将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1，将含有SAG1基因的表达盒克隆入伪狂犬病病毒基因缺失转移载体，经同源重组获得了表达弓形虫SAG1基因的重组伪狂犬病病毒。 真核表达载体的构建利用PCR技术扩增出弓形虫主要保护性抗原基因SAG1，克隆入真核表达载体pcDNA3.1，经酶切鉴定及序列分析，构建真核表达载体pcDNA/SAG1。 重组伪狂犬病毒的构建真核表达载体pcDNA/SAG1经双酶切获得SAG1基因表达盒(上游为CMV启动子，下游为BGH ployA信号)，并将其克隆入伪狂犬病病毒转移载体p8KD，构建中间转移载体p8KD/SAG1。利用脂质体转染方法，将中间转移载体p8KD/SAG1与伪狂犬病毒rPRV/LacZ基因组共转染Vero细胞，经蓝白斑筛选，获得携带SAG1基因的重组伪狂犬病病毒rPRV/SAG1。 重组伪狂犬病毒的鉴定分别提取重组病毒rPRV/SAG1基因组DNA和总RNA，运用SAG1特异性引物进行PCR及RT-PCR，结果扩增出特异性目的条带。经Western blot和间接免疫荧光试验证实，重组病毒表达的SAG1蛋白能被抗弓形虫的多克隆阳性血清识别。重组病毒rPRV/SAG1的稳定性试验表明，该病毒在体外连续传20代，仍能检测到SAG1的表达，说明rPRV/SAG1具有较好的遗传稳定性。 动物保护性试验为鉴定rPRV/SAG1的免疫保护效果，以BALB/c小鼠进行了免疫保护性试验。 结果表明，真核表达载体pcDNA/SAG1及重组病毒rPRV/SAG1能诱导小鼠产生特异性的IgG抗体，产生较高水平的IL-2和IFN-γ；并且pcDNA/SAG1首免，rPRV/SAG1加强免疫能诱导更高水平的IL-2和IFN-γ。免疫小鼠感染弓形虫后生存时间明显延长，并且rPRV/SAG1免疫组获得60％的保护率。