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第一部分：RGD肽固定天然瓣膜支架的结构表征研究第一节线状RGD肽的合成目的制备含RGD（精-甘-天冬氨酸）基序的线状肽。方法Fmoc固相合成法制备GRGDSPC（甘-精-甘-天冬-丝-脯-半胱氨酸）肽，质谱和高效液相色谱法鉴定。结果GRGDSPC肽合成后，色谱分析其纯度＞95％，质谱检测分子量690.824g／mol。结论RGD肽可体外制备用于组织工程。第二节RGD肽与胶原膜的共价连接目的检测含RGD肽共价接枝胶原的可行性。方法制备胶原膜，利用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽与之结合，X射线光电子能谱法（XPS）表面分析。结果XPS谱图测得二硫键，证明已将GRGDSPC肽固定于胶原膜。结论化学接枝法可实现RGD肽对胶原类材料的表面修饰。第三节RGD肽与去细胞瓣的共价连接目的检测含RGD肽固定去细胞瓣的可行性。方法酶+去污剂法制备去细胞瓣，Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽与之结合，XPS法表面分析。结果XPS谱图测得二硫键，证明已将RGD肽固定于去细胞瓣。结论化学接枝法亦可实现RGD肽对去细胞瓣的表面修饰。第二部分：RGD肽固定天然瓣膜支架的功能表征研究第一节RGD肽固定对胶原膜细胞黏附性能的影响目的检测含RGD肽接枝胶原膜对细胞黏附性的影响。方法实验A组Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽结合胶原膜，B组将GRGDSPC肽与胶原膜直接混合，C组单纯胶原膜，D组则为未涂层孔板。体外培养大鼠主动脉肌成纤维细胞（MFBs）分别种植于四组支架，MTT法检测细胞黏附率。结果MTT法显示A组的黏附率明显较其它组增加，且一定程度上随时间和肽浓度递增。结论RGD肽表面修饰提高胶原类材料的细胞黏附性。第二节RGD肽固定对去细胞瓣细胞黏附性能的影响目的检测含RGD肽接枝去细胞瓣对细胞黏附性的影响。方法实验A组GRGDSPC肽化学接枝去细胞瓣，B组GRGDSPC肽与去细胞瓣直接混合，C组则为单纯去细胞瓣。种植大鼠主动脉MFBs，沉淀法和MTT法检测细胞黏附率，HE染色和扫描电镜观察。结果MTT法、沉淀法和HE染色图像分析显示，与其它组相比，A组的黏附率提高，且12h内随时间和肽浓度递增。结论RGD肽表面修饰去细胞瓣，改善细胞黏附性能，有利于组织工程心脏瓣膜（TEHV）构建。第三部分：RGD肽固定天然支架构建组织工程瓣膜的实验研究第一节RGD肽固定天然支架构建组织工程瓣膜目的研究含RGD肽表面修饰去细胞瓣对TEHV构建的影响。方法实验组Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽与去细胞瓣稳定结合，种植大鼠MFBs以构建TEHV。对照组则为未经处理去细胞瓣。体外培养1w，HE染色和扫描电镜观察，检测羟脯氨酸和DNA含量，RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、赖氨酰氧化酶（LOX）mRNA表达。结果与对照组比较，实验组形态学示细胞紧密联合且细胞外基质（ECM）丰富，羟脯氨酸和DNA含量增高，Ⅰ型胶原、LOXmRNA表达增强。结论RGD肽表面修饰促进种子细胞黏附、生长与ECM分泌，有利TEHV构建。第二节RGD肽联合TGF-β1基因转染构建组织工程瓣膜目的研究含RGD肽表面修饰联合转化生长因子TGF-β1基因转染对去细胞瓣构建TEHV的影响。方法Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽与去细胞瓣结合，然后种植MFBs构建TEHV。实验A组采用天然支架和未转染细胞，B组为天然支架和TGF-β1基因转染细胞，C组为GRGDSPC肽固定支架和未转染细胞，D组为GRGDSPC肽固定支架和TGF-β1基因转染细胞。体外培养1w，HE染色和扫描电镜观察，检测羟脯氨酸和DNA含量，ELISA法检测TGF-β1含量，RT-PCR法检测TGF-β1mRNA表达。结果D组细胞紧密联合且ECM丰富，B、D组较A组羟脯氨酸含量增加，C、D组较A组DNA含量增高，B、D组较A组TGF-β1蛋白含量和mRNA表达升高。结论RGD肽表面修饰联合TGF-β1基因转染，协同促进细胞生长和ECM新生，促进TEHV构建。