生命个体由多种有机物及无机物组成，生物体的种种生命活动是化合物相互间高度有序作用的结果。人们对生命现象的研究不再只停留在个体、系统、器官、组织及细胞水平上，更要探讨组成生物体的物质的结构与功能。因此，对生物大分子的检测，是生命科学研究及医学诊断的实际需要。传统的检测技术，如聚合酶链反应、western印迹、质谱，存在仪器昂贵、耗时、操作复杂的问题。随着检测技术在医疗领域的广泛应用，对快速、简便的检测方法的需求不断扩大。等温检测对仪器要求低，操作简便，可以在有限的条件下进行检测。　　非编码小RNA在体内起多重调控作用，是生物体内一类重要的物质。有数种类型的小型非编码RNA在真核细胞中发挥功能，其中包括18-24个核苷酸的microRNA，21个核苷酸的siRNAs，26-30个核苷酸的piRNA。microRNA是基因表达的内生调控元件，主要功能是在转录后抑制mRNA翻译。高灵敏度、高特异性的小RNA检测不仅是研究受这些RNA调控的生理过程的需要也是更好地理解相关疾病的需要。　　恶性肿瘤已经成为人类死亡的第一位原因，每年约有上千万人死于各种癌症。癌症由多因素引起的疾病。随着现代工业的发展和生活方式的变化，肿瘤的发病率与死亡率呈明显上升趋势。早期的肿瘤较容易切除，可以延长患者存活时间。因此，肿瘤的早期诊断和预防是现今肿瘤临床研究的热点。　　近年来研究发现，microRNA与多种人类肿瘤相关。并有实验证实microRNA既有抑癌作用,又有促癌作用。microRNA是基因表达调控网络的重要组成部分，影响着多条信号传导通路。对不同肿瘤组织特定microRNA表达水平的检测和研究不但利于阐明肿瘤的发生发展机制，而且可以为肿瘤的诊断和治疗提供理论依据。　　以核酸互补杂交原理为基础，人们根据microRNA的特点发展了许多的检测方法。其中，等温技术在现场快速检测诊断方面优势明显。而且核酸等温扩增技术由于不需要温度变化的时间过程，使其摆脱了对变温仪器的依赖，实现快速检测。　　由于以上原因，综合文献报道，本研究选择microRNA let-7a作为检测对象，联用了分子信标、锁式探针、连接酶、聚合酶 phi29、限制性单链切割酶Nt.BbvCI，建立了一种简便、快速的生物大分子荧光信号放大检测技术，即切口酶介导增益性RCA信号放大microRNA检测。我们设计了一种带两个切口酶Nt.BbvCI的锁式探针与分子信标，当锁式探针与let-7a结合后，在连接酶的作用下形成环，然后聚合酶以microRNA为引物，以环为模板进行滚环反应。锁式探针及分子信标可与产物互补结合。切口酶Nt.BbvCI对双链进行识别切割，切割并被置换下来的片段，能够既可以打开分子信标又可以作为引物引发滚环反应。新提出的检测方法可以对靶microRNA进行超灵敏的检测，检测下限达到10 pM，可以适用的线性检测范围是1×10-11M-2×10-9M，可以区分出单碱基突变，具有较好的特异性。