UreB酸奶的研制及其抗幽门螺杆菌感染的动物实验研究

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目的:利用UreB基因工程乳杆菌(UreB-L6032)研制出一种预防幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的UreB活性酸奶,并对其抗Hp感染的能力进行动物实验研究。方法:1.UreB酸奶的制备及其检测。利用发酵奶制备技术将UreB-L6032(能够表达Hp UreB蛋白的保加利亚乳杆菌L6032)菌株发酵制成UreB酸奶,然后对自制的UreB酸奶进行活菌计数、pH值测定、质粒的稳定性和UreB蛋白的表达分析,并以自制的含原始L6032菌株(不表达Hp UreB蛋白)的普通酸奶作为对照。2. UreB酸奶抗幽门螺杆菌感染的动物体内研究。Balb/c小鼠被随机分成A(阴性组)、B(UreB酸奶组)、C(普通酸奶组)、D(感染组)四组,作预防性抗Hp感染的实验,结束后测定小鼠脾淋巴细胞培养上清液IL-10、IFN-γ、血清特异性IgG和胃粘膜sIgA水平,以及对胃粘膜进行快速尿素酶实验和Hp培养。结果:1.自制的UreB酸奶和普通酸奶呈半凝固状,表面洁白光滑,没有乳清析出,闻之有奶香味。经检测,其pH和一般市售酸奶接近,内含UreB-L6032或L6032活菌量较一般市售酸奶高,UreB-pMG36e质粒在UreB酸奶中也能稳定存在,并且UreB-L6032在酸奶中也能表达相应的Hp UreB蛋白。2.与一般酸奶相比,UreB酸奶和普通酸奶组两个组的IFN-γ均比感染对照组明显降低,但UreB酸奶组IFN-γ水平较普通酸奶组的降低并无显著性意义。UreB酸奶组的IL-10水平较普通酸奶组有显著性升高,两组均较感染对照组水平均有显著性的升高。UreB酸奶还能诱导小鼠体内特异性Hp IgG的产生,至实验结束时,该组的特异性IgG水平较感染对照组明显减少,但普通酸奶组IgG的减少并无显著性降低。据胃粘膜快速脲酶实验结果阳性和胃粘膜Hp培养结果阳性最终确定UreB酸奶组小鼠Hp感染率较感染对照组下降了40%,普通酸奶组小鼠的Hp感染率较感染对照组也有20%下降。结论:成功的研制出了功能性的UreB酸奶,该酸奶的含菌量高,质粒稳定,能表达Hp UreB蛋白。经动物体内实验证明了UreB酸奶比起一般普通酸奶其预防Hp的感染的效果更为显著。
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