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肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药性,即多药耐药现象仍是造成化疗失败的主要原因。人类MDR1基因编码的P-糖蛋白在肿瘤细胞膜表面的超表达是其产生主要机制。通过基因重组方法构建MDR1重要功能区突变体可以增强或减弱Pgp的功能;近年大量研究表明,基因疫苗免疫接种后能够有效地将其编码的抗原递呈给免疫系统,诱导体内的免疫应答,构建高效的基因疫苗已成为抗肿瘤研究热点之一。本研究利用Pgp胞外区抗原特性,以pcDNA3为载体,构建其与MDR1基因约1Kb片段的重组基因疫苗pcMDR1,进行小鼠免疫接种,分析其免疫学效应。将此pcMDR1转染人类K562红白血病细胞系,结果表明该序列表达产物具有Pgp抗原特异性,其转染K562细胞的真核表达产物可被标准化抗Pgp抗体特异性识别,pcMDR1免疫鼠血清与市售抗Pgp抗体均可特异性结合Pgp,而pcDNA3免疫鼠血清及正常鼠血清则无此特性,且免疫鼠血清抗体效价测定可达1:2000~1:4000。我们用MTT法进行细胞存活率的实验,用荧光倒置显微镜观察其细胞内的的药物蓄积。结果发现用pcMDR1免疫小鼠的Hep-A-22肝癌细胞与对照组相比,其细胞内药物浓度较高,这可能是因为产生的抗体拮抗了Pgp的活性。
本文构建的Pgp重组基因疫苗与传统疫苗相比可以简化烦琐的抗原纯化过程,可大量、经济地制备抗Pgp抗体,用于临床MDR检测,为进一步制备抗Pgp单链抗体用于封闭肿瘤细胞表面超表达的Pgp,Pgp就不能将进入胞内的化疗药物泵出胞外,发挥化疗药物的细胞毒作用杀死肿瘤细胞,为进行肿瘤耐药的免疫靶向治疗提供了实验理论依据。