论文部分内容阅读
大黄素(Emodin)是从广泛的药用植物根茎中提取出的天然蒽醌类化合物。临床上,大黄素主要被用于抗菌和抗炎。研究表明,大黄素能够调节体内氧化还原生理过程。自由基理论认为,提高机体抗氧化性或者抑制体内自由基产生能够有效延缓衰老、延长寿命。然而,大黄素这一天然化合物对生物寿命的影响及其可能的分子作用机理尚不清楚。 目的:选择秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C. elegans)为研究动物模型,评价大黄素的体内抗氧化、延寿作用,并深入探究其分子作用机理。 方法:1.寿命分析:用不同浓度的大黄素(0,50,150,300 μM)培养L4期野生型线虫,分析大黄素对线虫寿命的影响,并筛选出最佳作用浓度;2.应激能力:在 37℃热应激和百草枯诱导的过氧环境下,检测大黄素对野生型线虫抗应激能力的影响;3.体内自由基水平:通过运用基因荧光探针探究大黄素是否能够降低体内自由基水平;4.信号通路研究:实验采用各种突变株,通过检测大黄素对突变线虫寿命或基因表达的影响,确定其作用信号通路;5.转录调节因子亚细胞定位:荧光显微镜观察实验组和对照组daf-16::gfp和skn-1:gfp转基因线虫,分析大黄素对转录调节因子DAF-16 和SKN-1亚细胞定位的影响;6.基因转录:通过RT-PCR技术检测大黄素对DAF-16下游抗衰老基因表达水平的影响;7.热量限制:通过检测大黄素对咽泵抑制的突变线虫寿命的影响及对咽泵次数的影响,探究大黄素是否通过热量限制发挥延寿作用;8.生殖能力:通过统计线虫每日产卵量探究大黄素是否通过生殖系统以抑制来发挥延寿作用。 结果:1.大黄素能够在一定的浓度范围内有效延长线虫寿命,于150μM 具有最佳作用效果;2.大黄素提高线虫抗应激能力,并且明显降低线虫体内自由基水平;3.大黄素通过胰岛素信号通路发挥延寿作用;4.大黄素促进转录因子DAF-16 入核,并且在很大程度提高了 DAF-16 下游抗衰老基因的转录水平;5.大黄素的延寿和抗应激作用依赖 SIR-2.1;6.大黄素不是通过热量限制和生殖抑制发挥延寿作用。 结论:此研究揭示了大黄素能够通过胰岛素信号通路、依靠 DFA-16 和SIR-2.1 来促进抗衰老基因表达,从而发挥抗氧化和抗衰老的作用。因此,此研究证明大黄素可作为一种新型潜力药用于进一步对抗衰老及相关退行性疾病的研究中。此研究建议其能够作为有益的成分添加到食物中来提高人体的健康水平。